研究課題
線虫C.エレガンスは成虫でも体長1ミリ前後と、質量分析イメージング法 (IMS)で解析されてきた材料としては非常に小さく、これまで我々が行ったMALDI法によるイメージングでは発現細胞・組織の特定が困難であった。そこで高解像度での解析が可能なTOF-SIMS法によるイメージングの導入を行い、ナノレベルの高解像度での生体分子の分布を明らかにする。本年度は研究代表者木村芳滋が浜松医科大学から神奈川県立保健福祉大学に移動したことに伴い、研究環境の再構築を行うとともに最終年度として線虫をTOF-SIMS法で観察した。昨年の条件決定の結果、最適であることが確定したパラホルムアルデヒド固定後、凍結切片を作製した線虫サンプルを用いた。パラホルムアルデヒドの固定により生体分子の感度の低下は見られない一方で形態の維持は著しい上昇が見られた。線虫の観察は研究協力者石崎逸子氏、眞田則明氏(アルバックファイ)の協力の下にTRIFT Vシステムを用いてTOF-SIMSイメージングを行った。Arガスクラスターイオンビーム(Ar-GCIB)で表面をスパッタして表面のクリーニングをしてやることにより、ステアリン酸(SA)、オレイン酸(OA)、リノレン酸(LA)、γ-リノレン酸(GLA)、ジホモ-γ-リノレン酸(DGLA)、アラキドン酸(AA)、α-リノレン酸(ALA)、ステアリドン酸(STA)、ω-アラキドン酸(O3AA)、エイコサペンタエン酸(EPA)などの脂肪酸の検出感度が大幅に上昇した。これらの結果から、当初の予定通り線虫のTOF-SIMS解析の諸条件は確定した。今後は変異体や培養条件の変化における生体分子の発現量や発現パターンの変化を観察するとともにより細かい発現細胞・組織の特定を試みる予定である。
すべて 2015
すべて 雑誌論文 (1件) (うち査読あり 1件、 オープンアクセス 1件、 謝辞記載あり 1件)
Anal Bioanal Chem.
巻: 407 ページ: 7589-7602
10.1007/s00216-015-8932-7
