研究課題
本年度は胎生期脳の各発生ステージにおけるリーリン受容体の発現を詳細に解析した。受容体ApoER2は脳室下帯に強く発現し、さらに脳表層にある辺縁帯にも発現がみられた。脳室下帯での発現は多極性細胞の細胞体と突起に局在していた。一方、もう一つの受容体VLDLRの発現は辺縁帯に限局してみられた。VLDLRの細胞内局在をGFP標識したニューロンの免疫染色によって解析したところ、脳表に到達したニューロンの樹状突起上にシグナルが見られた。さらにタグを付けた外来性のVLDLRを発現させると、樹状突起の遠位側への限局した局在がみられた。またApoER2とVLDLRの辺縁帯での局在を二重染色により観察したところ、重複して見られるシグナルと個別のシグナルが認められた。これらの結果から２つのリーリン受容体は異なる分布と細胞内局在を示し、個別の機能を有することが示唆された。ApoER2の脳室下帯における機能を調べるために、ノックアウトマウスにおけるニューロン移動をGFPによって標識し観察した。その結果、上層および下層ニューロンの両方において、脳室下帯および中間帯での細胞移動の遅延がみられた。さらに、辺縁帯へと侵入するニューロンが認められた。これらの結果は、ApoER2がニューロン産生期を通して、多段階にニューロン移動を制御していることを示している。
2: おおむね順調に進展している
胎生期脳の各発生ステージにおけるリーリン受容体の発現パターンの解析は概ね予定通り進んだ。ApoER2ノックアウトマウスにおけるニューロン移動の解析についても順調に進行している。
ApoER2の脳室下帯における機能をさらに調べるために、初代培養を用いる。子宮内エレクトロポレーション法により多極性細胞を標識し、２日後に培養することで多極性細胞を得る。ここにリーリンを添加することにより細胞形態と移動パターンに与える影響を調べる。またApoER2のノックダウン、ApoER2ノックアウトマウス由来細胞での変化を同様に調べる。
本年度に行った実験の一部が予想より効率よく進められ、予定していたよりも少ない実験動物、試薬、消耗品の購入により完了できた。そのため、残った研究費は次年度の研究をより能率的に進めるために使用することにした。
遺伝子導入実験および培養実験に必要な遺伝子導入用試薬、培養用試薬、培養用消耗品、対照実験のための実験動物を購入し、研究を遂行することとする。
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すべて 雑誌論文 (2件) (うち査読あり 2件、 謝辞記載あり 2件) 学会発表 (1件)
Journal of Comparative Neurology
巻: 523 ページ: 463-478
10.1002/cne.23691
Neuroscience Research
巻: in press ページ: in press
10.1016/j.neures.2014.12.013
