| 研究課題/領域番号 |
25450204
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| 研究機関 | 宇都宮大学 |
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研究代表者 |
横田 信三 宇都宮大学, 農学部, 教授 (60210613)
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| 研究分担者 |
上高原 浩 京都大学, (連合)農学研究科(研究院), 准教授 (10293911)
吉永 新 京都大学, (連合)農学研究科(研究院), 准教授 (60273489)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | シラカンバ / カバノアナタケ / ペルオキシダーゼ / MALDI/TOF/MSイメージング / 樹病 |
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| 研究実績の概要 |
本年度の研究においては、昨年度に引き続き、癌腫病菌カバノアナタケIO-U1株に感染した、3ヶ月生シラカンバ幼植物体No.8に発現する、菌感染特異的ペルオキシダーゼの組織内分布を、マトリックス支援レーザー脱離イオン化・飛行時間型質量分析法 (MALDI/TOF/MS) イメージング解析法を用いて検討した。3ヶ月生のシラカンバ幼植物体を調製し、主茎に傷を付け、そこにカバノアナタケIO-U1株の菌糸体を接種した。また、対照として、無傷・無菌及び有傷の植物体も、それぞれ用意した。各処理後、植物体を更に2、10、30日間培養した。各期間培養した植物体を収集し、処理部を採取した。各試料を急速凍結し、横断面切片を作成した。得られた切片を用いて、菌感染特異的ペルオキシダーゼのMALDI/TOF/MSにより得られたマススペクトルピークを基に、MALDI/TOF/MSイメージング解析を行った。今回は、別のタイプのマトリックスを使用した。イメージング解析の結果、菌感染特異的ペルオキシダーゼに由来すると思われるシグナルは2、10、30日間培養した植物体の横断面切片において、木部全体に観察された。しかし、組織化学的染色によって観察された、シグナルの局在は観察されなかった。
本年度の研究においては、イメージング解析の対象となる別のタンパク質を探索するために、菌感染特異的タンパク質の同定を行った。菌接種後2日目の植物体を収集し、急速凍結後、タンパク質を抽出した。サンプルを二次元電気泳動にかけ、CBBで染色後、画像解析により、12個の菌感染特異的タンパク質を検出した。これらのタンパク質を単離し、消化後、液体クロマトグラフィー・タンデム質量分析法により分析した。データベース検索により、これら12個のタンパク質を同定した。
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