| 研究概要 |
本研究では、遺伝子手法を用いた食品中の微生物迅速モニタリングの際に常に問題になっていた、生菌死菌の判別について、核酸結合試薬であるエチジウムブロミドモノアジド（EMA）、プロピディウムモノアジド（PMA）等を用いて解決を図り、より正確なモニタリング方法(NBR-PCR法)を確立することを目的としている。研究は大きく2つのフェーズに分け、純培養系での細胞損傷と核酸結合試薬の浸透性、結合性、その反応最適化についておこない、次に実際の食品製造を考慮し、食品中で加熱、冷凍、薬剤等で細菌を殺菌した際のNBR-PCR法の適用性について検討を加えることとしているが、うち初年度では基礎的研究として核酸結合試薬を作用させる際の最適化を中心に検討を行った。細菌より抽出したDNAに対しPMAを混合し、各種波長を照射できるLEDランプにより照射波長、照射時間の最適条件を探索した。また、細胞の生死とPMA-リアルタイムPCRがどの程度相関するか明らかとするため、細胞の損傷度とPMAが死細胞へ導入される効率についても検討を行った。本年度の研究成果に関しては、FoodMicro2014(Nantes, France)における発表および国際誌への投稿を予定している。
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