| 研究課題/領域番号 |
25450304
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 研究機関 | 長崎大学 |
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研究代表者 |
長富 潔 長崎大学, 水産・環境科学総合研究科(水産), 教授 (40253702)
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| 研究分担者 |
原 研治 長崎大学, 水産・環境科学総合研究科(水産), 教授 (10039737)
金井 欣也 長崎大学, 水産・環境科学総合研究科(水産), 教授 (40145222)
小田 達也 長崎大学, 水産・環境科学総合研究科(水産), 教授 (60145307)
吉田 朝美 長崎大学, 水産・環境科学総合研究科(水産), 助教 (80589870)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | flagellin / 抗酸化酵素 / プロモーター / 魚病細菌 / 酸化ストレス / 細胞培養系 |
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| 研究概要 |
本研究では主にヒラメマクロファージの細胞培養系で細胞生物学的手法を用いて、エドワジエラ症の原因菌Edwardsiella tarda (E.tarda) 強毒株flagellinによるマクロファージの免疫応答、抗酸化酵素の転写制御機構の解析、並びに細胞内シグナル伝達経路を明らかにすること、次いで、分子生物学的手法を用い、網羅的プロテオーム解析により未知の病原性関連因子を探索することを目的とした。
本年度は、エドワジエラ症の病原因子の候補として同定されたE.tarda強毒株及び弱毒株の両flagellin遺伝子の全塩基配列を決定し、各々416アミノ酸と359アミノ酸に相当するORFを確認した。また、E.tarda両菌株由来flagellin全一次構造の相同性解析の結果、弱毒株由来flagellin遺伝子の一部が欠損していることが明らかになり、その欠損領域が強毒株の持つ病原性に関与していると推察した。現在は、大腸菌による大量発現系の構築を行っている。
一方、プロモーター領域の解析では、ヒラメCu,Zn-SOD遺伝子の転写開始点の5’-上流1,200 bpの塩基配列を決定した。この配列中に、哺乳類Cu,Zn-SOD遺伝子の転写制御に関与するC/EBPα並びにNF-IL6の結合配列が各々確認されたので、これらの結合配列がヒラメCu,Zn-SOD遺伝子の発現制御部位であると推定した。また、Mn-SOD遺伝子の場合、転写開始点より5’-上流300 bp付近までに哺乳類Mn-SOD遺伝子のプロモーター領域にはないTATAボックスやCCAATボックスの存在を確認した。ヒラメCu,Zn-SOD遺伝子プロモーター領域については、レポーターアッセイ系を構築中である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
E.tarda強毒株及び弱毒株flagellinの大腸菌による発現系の構築はやや遅れている状況であるが、ヒラメSOD遺伝子のプロモーター領域の解析ではいくつかの新知見が得られており。全体的には概ね順調に進展している。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後は、flagellin添加に伴うヒラメ抗酸化酵素遺伝子の転写制御機構の解析に重点を置き、関連する転写制御因子の探索に取り組む。
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