| 研究課題/領域番号 |
25450470
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 研究機関 | 東京農業大学 |
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研究代表者 |
小川 英彦 東京農業大学, 応用生物科学部, 准教授 (20339089)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | 胎盤形成 / 栄養膜幹細胞 / 雌雄ゲノム / 発生・分化 / 発現制御 |
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| 研究概要 |
胎盤の幹細胞である栄養膜幹細胞（TS細胞）はFgf4依存的に転写因子Cdx2を発現し未分化能を維持する。雄ゲノムしか持たない雄核発生胚から樹立した栄養膜幹細胞（ATS細胞）では、Fgf4非存在下でもCdx2が発現する。そこで、本研究ではATS細胞におけるCdx2発現機構を明らかにすることにより、胎盤形成における雌雄ゲノムの役割について新たな知見を得ることを目的とした。
TS細胞においてFgf4依存的なCdx2の発現には、MEK-ERK経路を介したシグナル伝達系が関与していることが知られている。そこで、ATS細胞におけるFgf4非依存的なCdx2発現にMEK-ERK経路が関与しているかの明らかにするために、阻害剤U0126がCdx2の発現に及ぼす影響について解析を行った。その結果、U0126を添加したATS細胞では、Cdx2の発現量は非添加区と比較して減少した。したがって、ATS細胞ではFgf4非依存的にMEK-ERK経路を介してCdx2を発現維持していると考えられた。また、阻害剤によりCdx2の発現が完全に抑制されなかったことから、ATS細胞にはMEK-ERK経路を介さないCDx2発現制御機構が存在すると考えられた。
また、ATS細胞ににおいてFgf4非存在下でCdx2の発現を維持させる原因遺伝子を特定するために、Fgf4非存在下でTS細胞と比較してATS細胞で発現が上昇する遺伝子をマイクロアレイを用いて網羅的に解析した。Cdx2と類似した発現変動を示す遺伝子を抽出した結果、225遺伝子は候補遺伝子として選出された。現在、抽出された遺伝子から候補遺伝子を絞り込んでいるところである。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
交付申請書に記載した平成25年度の研究実施計画の内容をほぼ達成できたため、おおむね順調に進展していると判断した。
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| 今後の研究の推進方策 |
平成25年度に、マイクロアレイ解析により抽出された候補遺伝子が、ATS細胞におけるCdx2発現に関与しているのかを検証するために、候補遺伝子のsiRNAをATS細胞へ導入し、候補遺伝子の発現を抑制させる。発現が抑制されたATS細胞においてCdx2の発現が抑制されるかを評価する。
また、ATS細胞ではFgf4非依存的にMEK-ERK経路を介してCdx2を発現維持していると考えられた。MEK-ERK経路の活性化には、タンパク質のリン酸化は必要である。そこで、Fgf4非依存的なCdx2の発現がMEK-ERK経路を介しているかどうかを検証するために、タンパク質のリン酸化状態を解析する。
さらに、ATS細胞ではMEK-ERK経路以外のシグナル伝達系によりCdx2の発現が維持されている可能性もある。そこで、様々なシグナル伝達系の阻害剤を用いて、Cdx2の発現に及ぼす影響を明らかにする。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
年度内での使用金額を当該年度の所要額(B)の範囲内に抑えたため、端数として生じた。
消耗品費に計上して、平成26年度に使用する。
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