| 研究実績の概要 |
3頭のマイクロミニピッグ（MMpig）胎児に由来する細胞（胎児線維芽細胞1、2および3）を用いて作製したクローン胚を8mMのバルプロ酸で24時間処理後、MMpig仮親の卵管に移植した。一部のクローン胚は、バルプロ酸処理を行わずに移植した。162個のクローン胚をバルプロ酸処理をしないで移植した場合には、仮親の妊娠は認められなかった。一方、152個のクローン胚をバルプロ酸処理後に移植した仮親は妊娠し、帝王切開によって5頭の産子が得られた。そのうち2頭は死産で奇形が認められたが、3頭は生存しており形態的な異常は見られなかった。マイクロサテライトマーカー解析の結果、死亡産子2頭および生存産子2頭は胎児線維芽細胞2に、生存産子1頭は胎児線維芽細胞1に由来するクローンであることが示された。以上の結果から、活性化後にバルプロ酸処理をしたMMpig体細胞クローン胚は、産子にまで発生し得ることが明らかとなった。
次に、異種移植抗原α-Galエピトープを合成する酵素であるα-1,3-ガラクトシルトランスフェラーゼ（α-GalT）遺伝子をノックアウトした胎児線維芽細胞3に由来するクローン胚を作製し、それらの体外発生に及ぼすバルプロ酸の影響について検討した。その結果、クローン胚をバルプロ酸で処理することにより、胚盤胞形成率が有意に増加した。また、α-Galエピトープを欠失した胚盤胞の割合は、バルプロ酸処理の影響を受けなかった。以上の結果から、α-GalT遺伝子をノックアウトしたMMpig体細胞に由来するクローン胚の体外発生も、バルプロ酸処理によって改善することが示された。
本研究の結果から、MMpigにおける体細胞核移植技術が確立された。また、この技術を応用して遺伝子改変MMpigを作出し得る可能性が示された。
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