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2014 年度 実施状況報告書

選択的分離手法を駆使した抗体医薬の体内動態解析法の開発と臨床分析への展開

研究課題

研究課題/領域番号 25460040
研究機関静岡県立大学

研究代表者

轟木 堅一郎  静岡県立大学, 薬学部, 准教授 (70341451)

研究分担者 林 秀樹  岐阜薬科大学, 薬学部, 准教授 (00419665)
研究期間 (年度) 2013-04-01 – 2016-03-31
キーワード抗体医薬 / HPLC分析 / 血中薬物濃度分析
研究実績の概要

本年度はイムノアフィニティー精製-高温逆相LC法による抗体医薬品の血漿薬物濃度分析法開発を実施した。この方法では,特異的抗体を修飾したアフィニティー担体により,IgGが多量に存在する血液試料の中から抗体医薬のみを選択的に捕集する。捕集した抗体医薬を,IgGに対して高い分離と感度が期待できる高温逆相LC-蛍光検出により分析することで,血漿中薬物濃度分析に十分な感度で分析可能となる。
アフィニティー精製の迅速化と回収率の向上を期待して,直径約2.8 μmの磁性微粒子をアフィニティー精製用担体として使用した。抗体医薬品には抗癌剤であるBevacizumabと,関節リウマチ治療薬であるInfliximabを使用した。
作製したアフィニティビーズにより,ヒト血漿中から抗体医薬のみを選択的に補集することができ,確立した高温逆相LC条件により,血漿成分の妨害を受けることなく抗体医薬品を15分以内に分析可能であった。また,分析バリデーションを実施したところ,1-20 μg/mlの範囲において優れた定量性,精度が得られた。本法はLC-MS/MS を用いずとも十分な感度で簡便に血中薬物濃度分析が可能となることから,臨床現場での利用も期待できる。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

現在までの達成度としては,おおむね順調に進行していると考えている。その理由として,前年度に開発したトリプシン消化-LC/MS/MS分析法とは全く異なる新規分析法を構築することができたこと,さらに構築した分析法を添加血漿分析のみならず,抗体医薬が投与された関節リウマチ患者の血中薬物濃度分析まで適用できたことが挙げられる。本研究成果については,さらに臨床検体数を増やして,論文投稿を行う予定である。
次年度も問題なく研究を遂行できるものと考えている。

今後の研究の推進方策

H27年度は構築したイムノアフィニティー精製-高温逆相LC法をガン抗体医薬が投与された患者の血中薬物濃度分析へと適用する。本法の汎用化に向けた課題として,(1) 高価な抗体医薬イディオタイプ抗体を使用すること,(2) アフィニティー精製用磁気ビーズへの固定化の煩雑性,が挙げられる。(1)については抗体に代わる新たな分子認識素子の利用,(2)については現状のアミノ基を介した化学結合による固定化から,biotin-avidin相互作用による固定化について検討する。さらに研究代表者が開発したdress-upカラム法による可逆的な固定化についても検討することで課題の克服に努める。また,固定化担体についても現状の磁気ビーズから臨床現場でより利用しやすいモノリス型スピンカラムや固相抽出カートリッジなどの利用についても検討する。

  • 研究成果

    (37件)

すべて 2014 その他

すべて 雑誌論文 (15件) (うち査読あり 15件、 謝辞記載あり 2件、 オープンアクセス 2件) 学会発表 (21件) (うち招待講演 1件) 備考 (1件)

  • [雑誌論文] 4-(4,6-Dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl)-4-methylmorpholinium chloride as an enantioseparation enhancer for fluorescence chiral derivatization–liquid chromatographic analysis of DL-lactic acid.2014

    • 著者名/発表者名
      K. Todoroki, K. Goto, T. Nakano, Y. Ishii, J.-Z. Min, K. Inoue, T. Toyo'oka
    • 雑誌名

      J. Chromatogr. A

      巻: 1360 ページ: 188-195

    • DOI

      10.1016/j.chroma.2014.07.077

    • 査読あり / 謝辞記載あり
  • [雑誌論文] Simple and Sensitive Analysis of Histamine and Tyramine in Japanese Soy Sauces and Their Intermediates Using the Stable Isotope Dilution HILIC−MS/MS Method.2014

    • 著者名/発表者名
      K. Todoroki, Y. Ishii, C. Miyauchi, S. Kitagawa, J.-Z. Min, K. Inoue, T. Yamanaka, K. Suzuki, Y. Yoshikawa, N. Ohashi, T. Toyo'oka
    • 雑誌名

      J. Agric. Food Chem.

      巻: 62 ページ: 6206−6211

    • DOI

      10.1021/jf500767p

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Computational Prediction of Diastereomeric Separation Behavior of Fluorescent o-Phthalaldehyde Derivatives of Amino Acids.2014

    • 著者名/発表者名
      K. Todoroki, T. Nakano, H. Watanabe, J.-Z. Min, K. Inoue, Y. Ishikawa, T. Toyo'oka
    • 雑誌名

      Anal. Sci.

      巻: 30 ページ: 865-87-

    • DOI

      10.2116/analsci.30.865

    • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
  • [雑誌論文] Assessment of the Efficacy of Anticancer Drugs by Amino Acid Metabolomics Using Fluorescence Derivatization-HPLC.2014

    • 著者名/発表者名
      R. Tomita, K. Todoroki, K. Machida, S. Nishida, H. Maruoka, H. Yoshida, T. Fujioka, M. Nakashima, M. Yamaguchi, H. Nohta
    • 雑誌名

      Anal. Sci.

      巻: 30 ページ: 751-758

    • DOI

      10.2116/analsci.30.751

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Determination of dicyandiamide in infant formula by stable isotope dilution hydrophilic interaction liquid chromatography with tandem mass spectrometry.2014

    • 著者名/発表者名
      K. Inoue, T. Sakamoto, J.-Z. Min, K. Todoroki, T. Toyo'oka
    • 雑誌名

      Food Chem.

      巻: 156 ページ: 390-393

    • DOI

      10.1016/j.foodchem.2014.01.124

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Simultaneous microdetermination of bosentan, ambrisentan, sildenafil, and tadalafil in plasma using liquid chromatography/tandem mass spectrometry for pediatric patients with pulmonary arterial hypertension.2014

    • 著者名/発表者名
      Y. Yokoyama, M. Tomatsuri, H. Hayashi, K. Hirai, Y. Ono, Y. Yamada, K. Todoroki, T. Toyo’oka, H. Yamada, K. Itoh
    • 雑誌名

      J. Pharm. Biomed. Anal.

      巻: 89 ページ: 227–232

    • DOI

      10.1016/j.jpba.2013.11.007

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Determination of acetone in saliva by reversed-phase liquid chromatography with fluorescence detection and the monitoring of diabetes mellitus patients with ketoacidosis.2014

    • 著者名/発表者名
      S. Fujii, T. Maeda, I. Noge, Y. Kitagawa, K. Todoroki, K. Inoue, J.-Z. Min, T. Toyo'oka
    • 雑誌名

      Clin. Chim. Acta

      巻: 430 ページ: 140-144

    • DOI

      10.1016/j.cca.2014.01.006

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Isotopic variants of light and heavy L-pyroglutamic acid succinimidyl esters as the derivatization reagents for dl-amino acid chiral metabolomics identification by liquid chromatography and electrospray ionization mass spectrometry.2014

    • 著者名/発表者名
      T. Mochizuki, K. Todoroki, K. Inoue, J.-Z. Min, T. Toyo’oka
    • 雑誌名

      Anal. Chim. Acta

      巻: 811 ページ: 51-59

    • DOI

      10.1016/j.aca.2013.12.016

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Evaluation of a series of prolylamidepyridines as the chiral derivatization reagents for enantioseparation of carboxylic acids by LC–ESI–MS/MS and the application to human saliva.2014

    • 著者名/発表者名
      T. Kuwabara, T. Takayama, K. Todoroki, K. Inoue, J.-Z. Min, T. Toyo’oka
    • 雑誌名

      Anal. Bioanal. Chem.

      巻: 406 ページ: 2641-2649

    • DOI

      10.1007/s00216-014-7637-7

    • 査読あり
  • [雑誌論文] A quantitative analysis of the polyamine in lung cancer patient fingernails by LC-ESI-MS/MS.2014

    • 著者名/発表者名
      J.-Z. Min, A. Matsumoto, G. Li, Y.-Z. Jiang, H.-F. Yu, K. Todoroki, K. Inoue, T. Toyo'oka
    • 雑誌名

      Biomed. Chromatogr.

      巻: 28 ページ: 492–499

    • DOI

      10.1002/bmc.3059

    • 査読あり
  • [雑誌論文] UPLC/ESI-MS/MS-based determination of metabolism of several new illicit drugs, ADB-FUBINACA, AB-FUBINACA, AB-PINACA, QUPIC, 5F-QUPIC and α-PVT, by human liver microsome.2014

    • 著者名/発表者名
      T. Takayama, M. Suzuki, K. Todoroki, K. Inoue, J.-Z. Min, R. Kikura-Hanajiri, Y. Goda, T. Toyo'oka
    • 雑誌名

      Biomed. Chromatogr.

      巻: 28 ページ: 831-838

    • DOI

      10.1002/bmc.3155

    • 査読あり
  • [雑誌論文] In vivo imaging of reactive oxygen species in mouse brain by using [3H]Hydromethidine as a potential radical trapping radiotracer.2014

    • 著者名/発表者名
      K. Abe, N. Takai, K. Fukumoto, N. Imamoto, M. Tonomura, M. Ito, N. Kanegawa, K. Sakai, K. Morimoto, K. Todoroki, O. Inoue
    • 雑誌名

      J. Cereb. Blood Flow Metab.

      巻: 34 ページ: 1907-1913

    • DOI

      10.1038/jcbfm.2014.160

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Liquid chromatography/tandem mass spectrometry with fluorous derivatization method for selective analysis of sialyl oligosaccharides.2014

    • 著者名/発表者名
      Y. Sakaguchi, T. Hayama, H. Yoshida, M. Itoyama, K. Todoroki, M. Yamaguchi, H. Nohta
    • 雑誌名

      Rapid Commun. Mass Spectrom.

      巻: 28 ページ: 2481–2489

    • DOI

      10.1002/rcm.7042

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Rapid and sensitive determination of diacetylpolyamines in human fingernail by ultraperformance liquid chromatography coupled with electrospray ionization tandem mass spectrometry.2014

    • 著者名/発表者名
      J.-Z. Min, Y. Morota, Y.-Z. Jiang, G. Li, D. Kang, H.-F. Yu, K. Inoue, K. Todoroki, T. Toyo'oka
    • 雑誌名

      Eur. J. Mass Spectrom.

      巻: 20 ページ: 477-486

    • DOI

      10.1255/ejms.1301

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Evaluation of gardenia yellow using crocetin from alkaline hydrolysis based on ultra high performance liquid chromatography and high-speed countercurrent.2014

    • 著者名/発表者名
      K. Inoue, C. Tanada, H. Nishikawa, S. Matsuda, A. Tada, Y. Ito, J.-Z. Min, K. Todoroki, N. Sugimoto, T. Toyo'oka, H. Akiyama
    • 雑誌名

      J. Sep. Sci.

      巻: 37 ページ: 3619-3624

    • DOI

      10.1002/jssc.201400793

    • 査読あり
  • [学会発表] 再現性の高い固定相の着脱を可能とするドレスアップキラルカラムの開発2014

    • 著者名/発表者名
      石井裕大、轟木堅一郎、井出貴文、閔 俊哲、井之上浩一、濱島義隆、豊岡利正
    • 学会等名
      第25回クロマトグラフィー科学会議(京都)
    • 発表場所
      京都大学船井哲良記念講堂
    • 年月日
      2014-12-12 – 2014-12-12
  • [学会発表] イムノアフィニティー磁気ビーズと高温逆相LCを組み合わせた抗体医薬の血中薬物濃度分析2014

    • 著者名/発表者名
      中野達基、江田康拓、轟木堅一郎、閔 俊哲、井之上浩一、豊岡利正
    • 学会等名
      第25回クロマトグラフィー科学会議(京都)
    • 発表場所
      京都大学船井哲良記念講堂
    • 年月日
      2014-12-12 – 2014-12-12
  • [学会発表] イムノアフィニティー精製-高温逆相LCによる抗体医薬品の血中薬物濃度分析法の開発2014

    • 著者名/発表者名
      江田康拓、中野達基、轟木堅一郎、閔 俊哲、井之上浩一、豊岡利正
    • 学会等名
      新アミノ酸分析研究会第4回学術講演会(東京)
    • 発表場所
      東京大学武田先端知ビル
    • 年月日
      2014-11-17 – 2014-11-17
  • [学会発表] トリアジン構造を光学分離向上剤として用いるアミノ酸のHPLC分離分析法の開発2014

    • 著者名/発表者名
      中村美鈴、佐藤雄飛、後藤かの子、中野達基、轟木堅一郎、閔 俊哲、井之上浩一、豊岡利正
    • 学会等名
      新アミノ酸分析研究会第4回学術講演会(東京)
    • 発表場所
      東京大学武田先端知ビル
    • 年月日
      2014-11-17 – 2014-11-17
  • [学会発表] 遠隔位不斉識別試薬を用いるアミノ酸およびペプチド類のHPLC光学分離2014

    • 著者名/発表者名
      佐藤雄飛、中野達基、轟木堅一郎、井口和明、閔 俊哲、井之上浩一、武田厚司、豊岡利正:
    • 学会等名
      新アミノ酸分析研究会第4回学術講演会(東京)
    • 発表場所
      東京大学武田先端知ビル
    • 年月日
      2014-11-17 – 2014-11-17
  • [学会発表] イムノアフィニティー精製-高温逆相LCによる抗体医薬品の血漿中薬物濃度分析法の開発2014

    • 著者名/発表者名
      江田康拓、中野達基、轟木堅一郎、閔 俊哲、井之上浩一、豊岡利正
    • 学会等名
      日本病院薬剤師会東海ブロック・日本薬学会東海支部合同学術大会2014
    • 発表場所
      静岡県立大学
    • 年月日
      2014-11-09 – 2014-11-09
  • [学会発表] 遠隔位不斉識別試薬を用いるアミノ酸およびペプチド類のHPLC光学分離分析2014

    • 著者名/発表者名
      佐藤雄飛、中野達基、轟木堅一郎、井口和明、閔 俊哲、井之上浩一、武田厚司、豊岡利正
    • 学会等名
      日本病院薬剤師会東海ブロック・日本薬学会東海支部合同学術大会2014
    • 発表場所
      静岡県立大学
    • 年月日
      2014-11-09 – 2014-11-09
  • [学会発表] Simple and sensitive analysis of histamine and tyramine in Japanese soy sauces and their intermediates using the stable isotope dilution HILIC–MS/MS method.2014

    • 著者名/発表者名
      Yasuhiro Ishii, Kenichiro Todoroki, Chiemi Miyauchi, Sachiyo Kitagawa, Jun Zhe Min, Koichi Inoue, Kuniaki Suzuki, Yuko Yoshikawa, Norio Ohashi, Toshimasa Toyo’oka
    • 学会等名
      第19回静岡健康・長寿学術フォーラム(沼津)
    • 発表場所
      ふじのくに千本松フォーラム
    • 年月日
      2014-11-07 – 2014-11-07
  • [学会発表] 4-(4,6-Dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl)-4-methylmorpholinium chloride as an enantioseparation enhancer for fluorescence chiral derivatization - Liquid Chromatographic analysis of DL-lactic acid.2014

    • 著者名/発表者名
      Kanoko Goto, Tatsuki Nakano, Yasuhiro Ishii, Kenichiro Todoroki, Jun Zhe Min, Koichi Inoue, Toshimasa Toyo’oka
    • 学会等名
      第19回静岡健康・長寿学術フォーラム(沼津)
    • 発表場所
      ふじのくに千本松フォーラム
    • 年月日
      2014-11-07 – 2014-11-07
  • [学会発表] 4-(4,6-Dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl)-4-methylmorpholinium chloride as an enantioseparation enhancer for fluorescence chiral derivatization - Liquid Chromatographic analysis of DL-lactic acid.2014

    • 著者名/発表者名
      Kenichiro Todoroki, Kanoko Goto, Tatsuki Nakano, Yasuhiro Ishii, Jun Zhe Min, Koichi Inoue, Toshimasa Toyo’oka
    • 学会等名
      11th Japan-China International Symposium on Health Sciences (Shizuoka)
    • 発表場所
      静岡県立大学
    • 年月日
      2014-11-06 – 2014-11-06
  • [学会発表] フルオラス分離技術を基盤とする新規分離デバイスDress-upキラルカラムの開発とカルボン酸分離への応用2014

    • 著者名/発表者名
      石井裕大、轟木堅一郎、井出貴文、閔 俊哲、井之上浩一、濱島義隆、豊岡利正
    • 学会等名
      フルオラス科学研究会第7回シンポジウム(札幌)
    • 発表場所
      北海道大学
    • 年月日
      2014-09-09 – 2014-09-09
  • [学会発表] 選択的な捕集と検出を可能とするフルオラスプロテオミクス解析試薬の開発2014

    • 著者名/発表者名
      石井裕大、轟木堅一郎、閔 俊哲、井之上浩一、豊岡利正
    • 学会等名
      フルオラス科学研究会第7回シンポジウム(札幌)
    • 発表場所
      北海道大学
    • 年月日
      2014-09-09 – 2014-09-09
  • [学会発表] Dress-up chiral column: a new separation device for chiral compounds.2014

    • 著者名/発表者名
      Yasuhiro Ishii, Kenichiro Todoroki, Takafumi Ide, Jun Zhe Min, Koichi Inoue, Yoshitaka Hamashima, Toshimasa Toyo’oka
    • 学会等名
      RSC International Conference 2014
    • 発表場所
      幕張メッセ国際会議場
    • 年月日
      2014-09-05 – 2014-09-05
  • [学会発表] 4-(4,6-Dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl)-4-methylmorpholinium chloride as an enantioseparation enhancer for fluorescence chiral derivatization - liquid chromatographic analysis of DL-lactic acid.2014

    • 著者名/発表者名
      Kanoko Goto, Tatsuki Nakano, Yasuhiro Ishii, Kenichiro Todoroki, Jun Zhe Min, Koichi Inoue, Toshimasa Toyo’oka
    • 学会等名
      RSC International Conference 2014
    • 発表場所
      幕張メッセ国際会議場
    • 年月日
      2014-09-04 – 2014-09-04
  • [学会発表] キラル化合物の新規分離デバイス Dress-upキラルカラムのカルボン酸分離への応用2014

    • 著者名/発表者名
      石井裕大、轟木堅一郎、井出貴文、閔 俊哲、井之上浩一、濱島義隆、豊岡利正
    • 学会等名
      第12回次世代を担う若手のためのフィジカル・ファーマフォーラム2014(箱根)
    • 発表場所
      箱根高原ホテル
    • 年月日
      2014-07-15 – 2014-07-15
  • [学会発表] イムノアフィニティー精製-高温逆相LCによる抗体医薬品の血漿中薬物濃度分析法の開発2014

    • 著者名/発表者名
      中野達基、江田康拓、轟木堅一郎、閔 俊哲、井之上浩一、豊岡利正
    • 学会等名
      第12回次世代を担う若手のためのフィジカル・ファーマフォーラム2014(箱根)
    • 発表場所
      箱根高原ホテル
    • 年月日
      2014-07-14 – 2014-07-14
  • [学会発表] LCMS-8040を用いた医薬品および食品関連物質の簡便かつ高感度な分析法の開発2014

    • 著者名/発表者名
      轟木堅一郎
    • 学会等名
      島津食品分析セミナーin静岡(静岡)
    • 発表場所
      静岡駅パルシェ会議室
    • 年月日
      2014-07-08 – 2014-07-08
    • 招待講演
  • [学会発表] DMT-MMを光学分離向上剤として用いるアミノ酸のHPLC分離分析法の開発2014

    • 著者名/発表者名
      中村美鈴、佐藤雄飛、後藤かの子、中野達基、轟木堅一郎、閔 俊哲、井之上浩一、豊岡利正
    • 学会等名
      第60回日本薬学会東海支部大会(鈴鹿)
    • 発表場所
      鈴鹿医療科学大学薬学部
    • 年月日
      2014-07-05 – 2014-07-05
  • [学会発表] 遠隔位不斉識別試薬を用いるアミノ酸およびペプチド類のHPLC光学分離分析法の開発2014

    • 著者名/発表者名
      佐藤雄飛、中村美鈴、中野達基、後藤かの子、轟木堅一郎、閔 俊哲、井之上浩一、豊岡利正
    • 学会等名
      第60回日本薬学会東海支部大会(鈴鹿)
    • 発表場所
      鈴鹿医療科学大学薬学部
    • 年月日
      2014-07-05 – 2014-07-05
  • [学会発表] カルボン酸光学分離用Cinchona alkaloid型dress-upキラルカラムの開発2014

    • 著者名/発表者名
      石井裕大、轟木堅一郎、井出貴文、閔 俊哲、井之上浩一、濱島義隆、豊岡利正
    • 学会等名
      第21回クロマトグラフィーシンポジウム(名古屋)
    • 発表場所
      名古屋市工業研究所
    • 年月日
      2014-06-06 – 2014-06-06
  • [学会発表] 量子化学計算に基づくアミノ酸ジアステレオマーの光学分離メカニズムの考察2014

    • 著者名/発表者名
      中野 達基、轟木 堅一郎、石川 吉伸、閔 俊哲、井之上 浩一、豊岡 利正
    • 学会等名
      第74回分析化学討論会(郡山)
    • 発表場所
      日本大学郡山キャンパス
    • 年月日
      2014-05-24 – 2014-05-24
  • [備考] 所属研究室(静岡県立大学薬学部生体機能分子分析学分野)のHP

    • URL

      http://w3pharm.u-shizuoka-ken.ac.jp/~analchem/

URL: 

公開日: 2016-05-27  

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