ApollonによるMitosis制御機構

2013 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 25460084
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 研究機関: 国立医薬品食品衛生研究所
• 研究代表者: 内藤 幹彦 国立医薬品食品衛生研究所, 機能生化学部, 部長 (00198011)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2016-03-31
• キーワード: 細胞分裂 / サイクリン / ユビキチン

研究概要

ApollonによるMitosis制御機構を明らかにするために、Apollonと結合するMitosis制御因子CyclinAの局在を調べた。間期においてCyclinAは主に核内に、Apollonは主に細胞質に局在しており、両者は細胞内で相互作用しにくい状況にあると考えられたが、核膜の消失したM期においてはApollonとCyclinAは細胞全体に共局在していた。このM期においてApollonとCyclinAの相互作用をin situ proximity assayで検討した結果、M期においてのみ強いシグナルが得られ、これらのタンパク質が結合している事を示す結果となった。
次にM期におけるCyclinAの蓄積量に及ぼすApollonの影響を調べた。Apollon遺伝子破壊MEF、及び野生型MEFをNocodazoleで分裂中期に停止させ、抗CyclinA抗体で免疫染色する事によりCyclinAの蓄積量を比較した。その結果、Apollon遺伝子破壊MEFでは野生型に比べCyclinA蓄積量の増加した細胞が多数観察された。さらにGFP標識CyclinAを細胞に発現させ、細胞内でのCyclinAの分解を生細胞イメージングにより観察した。その結果、Apollonをノックダウンした細胞内ではM期におけるCyclinAの分解とM期の進行が遅延している事等が明らかになった。
これらの結果から、ApollonはM期におけるスピンドルチェックポイント非依存的なCyclinA分解に重要な役割を果たしている事が分かった。これらの研究成果をまとめて論文に発表した。

現在までの達成度 (区分)

1: 当初の計画以上に進展している

理由

平成２５年度に計画していた研究は概ね終了し、平成２６年度以後に計画していた研究を一部前倒しで進めている。

今後の研究の推進方策

平成２６年度以後は、Apollon UBC変異マウスの表現型解析、Apollon UBC変異MEFの細胞周期解析などを重点的に行い、Apollonによる細胞周期制御におけるApollon UBCドメインの機能等を明らかにする。

次年度の研究費の使用計画

３月に購入した物品の経理処理が４月以後になってしまったため、３月末時点での次年度使用額が０より大きい数字となった。
平成２６年度も消耗品の購入に多くの研究費を充てる予定。

研究成果

• [雑誌論文] APOLLON Protein Promotes Early Mitotic CYCLIN A Degradation Independent of the Spindle Assembly Checkpoint. (2014)
  • 著者名/発表者名: Kikuchi, R., Ohata, H., Ohoka, N., Kawabata, A., and Naito, M.
  • 雑誌名: J Biol Chem 巻: 289 ページ: 3457-3467
  • DOI: 10.1074/jbc.M113.514430
  • 査読あり
• [雑誌論文] Design and synthesis of tamoxifen derivatives as a selective estrogen receptor down-regulator. (2014)
  • 著者名/発表者名: Shoda, T., Okuhira, K., Kato, M., Demizu, Y., Inoue, H., Naito, M., and Kurihara, M.
  • 雑誌名: Bioorg Med Chem Lett 巻: 24 ページ: 87-89
  • DOI: 10.1016/j.bmcl.2013.11.078
  • 査読あり
• [雑誌論文] Development of hybrid small molecules that induce degradation of estrogen receptor-alpha and necrotic cell death in breast cancer cells. (2013)
  • 著者名/発表者名: Okuhira, K., Demizu, Y., Hattori, T., Ohoka, N., Shibata, N., Nishimaki-Mogami, T., Okuda, H., Kurihara, M., and Naito, M.
  • 雑誌名: Cancer Sci 巻: 104 ページ: 1492-1498
  • DOI: 10.1111/cas.12272
  • 査読あり
• [学会発表] Apollon細胞分裂初期においてスピンドルチェックポイント非依存的なcyclin Aの分解を促進する (2014)
  • 著者名/発表者名: 大岡 伸通，大畑 広和，内藤 幹彦
  • 学会等名: 日本薬学会第134年会
  • 発表場所: 熊本
  • 年月日: 20140328-20140330
• [学会発表] Apollon binds cyclin A and promotes degradation in early mitosis independent of spindle assembly checkpoint (2014)
  • 著者名/発表者名: Ohoka N, Ohata H, Naito M.
  • 学会等名: Keystone Symposia on Molecular and Cellular Biology, The Ubiquitin System: From Basic Science to Drug Discovery
  • 発表場所: Bigsky
  • 年月日: 20140108-20140111
• [学会発表] Apollon binds cyclin A and promotes degradation in early mitosis independent of spindle assembly checkpoint (2013)
  • 著者名/発表者名: 大岡 伸通，大畑 広和，内藤 幹彦
  • 学会等名: 第72回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 20131003-20131005
• [備考] 国立医薬品食品衛生研究所 機能生化学部ホームページ
  • URL: http://www.nihs.go.jp/dfbg/frame.html