| 研究課題/領域番号 |
25460184
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
山口 浩明 北海道大学, 薬学研究科(研究院), 准教授 (80400373)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | エイコサノイド / 薬物輸送担体 |
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| 研究概要 |
エイコサノイドをはじめとする脂質メディエーターは、生体局所におけるホメオスタシスの維持あるいは炎症をはじめとする種々の病態形成に関与している。これまでに、脂質メディエーターの薬理学的な解析は進展しているものの、脂質メディエーターの細胞外放出機構についてはほとんど明らかとされていない。本研究では、脂質メディエーター、特にエイコサノイドの細胞外放出機構について、これまでに未同定の放出機構の解明も含めた解析を行っている。
まず、エイコサノイド輸送評価系としてLC/MS/MSによる細胞内および細胞外エイコサノイドの一斉定量系を確立した。本系は、一度により多くの情報を得るために、適切なサンプル前処理法を検討し、一斉にω-3系（3型）およびω-6系（2型）脂肪酸由来エイコサノイドを定量可能な高感度測定系となっている。続いて、エイコサノイド産生細胞として汎用されているA549細胞における、細胞内および細胞外エイコサノイドプロファイルの作成を行った。刺激条件の変化により細胞内外の3型および2型エイコサノイドバランスが大きく変動する結果を得た。さらに、エイコサノイド輸送体としてしられているMRP4を発現した細胞より調製したinside-out膜小胞輸送系にて3型エイコサノイドの輸送を検討した。プロスタグランジンE3、F3alpha、トロンボキサンB3がMRP4によって輸送されることを明らかにした。
今後、エイコサノイド細胞外放出に関与する種々トランスポーターの寄与率に関する検討を行う。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
平成２５年度研究実施計画の一つであったエイコサノイド定量系が早期に完成し、本系を応用して細胞内外量の評価、あるいはトランスポーター発現inside-out膜小胞輸送系に応用できている。新規エイコサノイド放出タンパク質の同定のための基礎検討も進めており、現在まで順調に進展していると評価できる。
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| 今後の研究の推進方策 |
平成２６年度においては平成２５年度に引き続き、エイコサノイド放出トランスポーターの相対的な寄与率を明らかとする。
内因的に産生されるエイコサノイドの細胞外放出に関わる種々トランスポーターの寄与を評価する。同定された新規トランスポーターの特異的な阻害剤あるいはsiRNAを用いて、それぞれのトランスポーターの細胞外放出の寄与率を検討する。また、エイコサノイドの産生に関わる合成酵素類の発現が不可欠であるため、必要に応じて合成酵素類の遺伝子導入あるいは出発材料であるアラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸を添加した検討を行う。
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