| 研究課題/領域番号 |
25460229
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 研究機関 | 金城学院大学 |
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研究代表者 |
水谷 秀樹 金城学院大学, 薬学部, 教授 (80397504)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | 抗がん剤 / アポトーシス / 活性酸素 / マイトマイシンC |
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| 研究概要 |
本研究課題の目的は、現在臨床の場で使用されている抗がん剤と活性酸素種 (reactive oxygen species : ROS) との関係に注目し、抗がん剤の効果および副作用の発現機構を酸化ストレスの観点、すなわち酸化ストレスマーカーの観点から明らかにすることである。今年度は、DNAのアルキル化、活性酸素種(ROS)によるDNA鎖切断などを介して抗がん作用を示すマイトマイシンC (MMC)を用いて検討した。実験には、ヒト骨髄性白血病細胞HL-60およびHL-60由来でカタラーゼ高活性のHP100細胞を用いた。アポトーシスの検出はDNAラダー、核凝縮、Caspase-3/7活性で評価した。細胞毒性はLDH遊離で評価し、細胞内ROS産生は、CM-H2DCFDAと反応させ蛍光強度イメージサイトメーターで測定した。MMCによる24時間処理後のDNAラダーは、HL-60において0.5μMから観察されたのに対して、HP100では2.0μMから観察された。また、核凝縮、LDH遊離を指標とした細胞死、Caspase-3/7活性についてもHL-60で顕著であり、HP100においてMMCによるアポトーシスの抑制が認められた。さらに、細胞内ROS産生も同様の傾向であった。HP100はHL-60のカタラーゼ過発現株であり、HL-60の18倍のカタラーゼ活性を持ち、過酸化水素に対し340倍耐性を示す細胞である。したがって、MMCのアポトーシス誘導因子すなわち抗がん作用因子としてROSの1つである過酸化水素が重要であることが明らかになった。すなわち、過酸化水素がMMCの作用発現における重要な酸化ストレスマーカーの１つであることが示された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
マイトマイシンCと活性酸素種 (reactive oxygen species : ROS) との関係について、抗がん剤の効果および副作用の発現機構を酸化ストレスの観点、すなわち酸化ストレスマーカーの観点から明らかにすることができた。こうした点からおおむね順調に進展していると思われる。
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| 今後の研究の推進方策 |
平成２６年度は、マイトマイシンCによるDNA損傷が、単なるDNAのアルキル化なのか、活性酸素種(ROS)によるDNA鎖切断なのかを、8-OHdGの生成、コメット法などを用いて解明していく予定である。そして、アントラキノン系の抗がんなど他の薬剤についても検討したい。なお、２５年度に本学にフローサイトメトリー装置が新しく設置されたので、フローサイトメトリーを用いた解析も検討したい。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
当初は、マイトマイシンCによるDNA損傷の解析を8-OHdGの生成、コメット法などの一部を行う予定であったため。
次年度使用額を8-OHdGの生成、コメット法などを行う試薬の購入に当てたい。
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