| 研究課題/領域番号 |
25460349
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| 研究機関 | 長崎国際大学 |
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研究代表者 |
西奥 剛 長崎国際大学, 薬学部, 准教授 (90435115)
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| 研究分担者 |
古賀 允久 福岡大学, 薬学部, 助教 (60570801)
山内 淳史 福岡大学, 薬学部, 准教授 (90341453)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | CD147 / 白質障害 / シクロフィリンA / オリゴデンドロサイト |
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| 研究実績の概要 |
小血管性認知症において白質病変は大きな病理学的特徴であり、認知機能障害以外に運動障害や言語障害など多彩な神経症状を呈する。細胞外シクロフィリンA(CypA)の受容体であるCD147は、マトリックスメタロプロテアーゼ誘導因子としての役割だけでなく、オリゴデンドロサイトに豊富に存在するモノカルボン酸輸送体１を細胞膜上に輸送するシャペロンタンパク質としても機能する。そこで、本研究は脳血管性認知症の発症・進展機構に迫る新機軸として、CypAとCD147に着眼し、脳血管性認知症発症の分子機構を明らかにすることにより、新たな治療戦略ならびに新規認知症治療薬開発への活路を開く実験証拠を提示することを目指すものである。
本年度は、白質病変モデルを作成し、大脳白質におけるCypAならびにCD147の発現変動について検討した。マイクロコイルをマウスの総頚動脈に装着し、慢性的な脳血流の低下により白質障害を誘導するモデルの作成を試みるが、死亡率が高い。そのため、マウスの片側の総頚動脈を永久閉塞し、慢性的に脳血流を低下させ白質障害を誘発するモデルを作成することとした。このモデルは脳血流量が低下し、認知機能障害を呈することが報告されている。さらにマウスの総頚動脈へのマイクロコイルの装着処置にくらべ、片側頚動脈の永久閉塞は処置が簡易であり、死亡率も低い。現在、この白質病変モデルを作成し、CD147ならびにCypAの発現量の変動について検討を行っている。
マウスより初代培養オリゴデンドロサイトの調整を行っていたが、アストロサイトの混入が多いため、神経幹細胞を含むneurosphereからオリゴデンドロサイト前駆細胞に分化させ、ミエリン産生オリゴデンドロサイトへ分化する方法に切り替え検討中である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
マイクロコイルをマウスの総頚動脈に装着し、慢性的な脳血流の低下により白質障害を誘導するモデルの作成を試みるが、死亡率が高い。そのため、マウスの片側の総頚動脈を永久閉塞する白質病変モデルマウスに切り替え、検討を行っている。ミエリン塩基性タンパク質の免疫染色ならびにウェスタンブロッティングにより白質障害を検討中である。また、脳内におけるCypAならびにCD147の発現変動をウエスタンブロッティングにて、ミクログリアの集積ならびにオリゴデンドロサイトの脱落を免疫染色にて検討中である。
さらに、生後１日齢のマウス脳より調整した初代混合グリア培養細胞からのオリゴデンドロサイトの単離は、アストロサイトの混入が多い。そこで現在、生後１日齢のマウス脳より神経幹細胞を含むneurosphereを単離調整し、このneurosphereからオリゴデンドロサイト前駆細胞に分化させ、ミエリン産生オリゴデンドロサイトへ分化させる条件の検討を行っている。
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| 今後の研究の推進方策 |
引き続き白質病変モデルマウスを作成し、組織染色により白質病変を評価し、免疫染色によりミクログリアの集積、オリゴデンドロサイトの脱落について検討する。さらに、オリゴデンドロサイト脱落の要因として、細胞外マトリックスタンパク質ならびにインテグリンの発現変化について検討する。また、脳内におけるCypAならびにCD147の発現変動をウエスタンブロッティングにて解析する。またミエリン塩基性タンパク質とCypAならびにCD147の免疫二重染色を行い、白質におけるCypAとCD147の発現変動ならびに局在について検討する。
神経幹細胞を含むneurosphereから初代培養オリゴデンドロサイトを調整し、オリゴデンドロサイトの分化過程におけるCD147の発現変動について検討を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
平成26年度より、長崎国際大学に移動し、セットアップで使用額を大幅に抑えたため、次年度使用額が生じた。
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| 次年度使用額の使用計画 |
おおよそ15万円の次年度使用額が発生した。15万円のうち、5万円は解析に必要な、試薬の購入に充てる。また、残り10万円は、ピペットなどの実験器具や培養器具が不足しているため、その購入に充てることとしている。
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