| 研究課題/領域番号 |
25460364
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
宮崎 純一 大阪大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (10200156)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | ES細胞 / DNAメチル化 / キメラマウス / ヒストン修飾 / 未分化状態 |
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| 研究実績の概要 |
本研究では、Ces1ノックアウトES細胞を用いてCes1遺伝子の機能を明らかにすることにより、細胞の未分化性維持に係わる因子や機構を解明する。
① キメラ形成能の検討：CAG-EGFP遺伝子を導入したCes1ノックアウトES細胞を作成し、これを胚盤胞に注入し、キメラ胚の作製を行った。発生途中で胚を取り出し、ラベルされた細胞の分布を解析したところ、全身に分布することが示された。さらに、キメラマウスが誕生し、生殖系列へ伝達が起きることも確認された。これにより、Ces1ノックアウトES細胞が全能性を維持していることが確認された。 ② Ces1ノックアウトES細胞の増殖能の検討：MTTアッセイにより、ノックアウトES細胞、野生型ES細胞、rescue ES細胞の間で、増殖能を検討したところ、Ces1発現により増殖が低下することが示された。 ③ Ces1発現のRT-PCRによる解析：受精卵から胚盤胞までの胚を採取し、RNA抽出し、RT-PCRによりCes1遺伝子の発現を解析した結果、強い発現が確認された。 ④ Dppa3/Stella遺伝子の発現制御領域におけるCGのメチル化の解析：Dppa3/Stella遺伝子の発現制御領域について、CGのメチル化をノックアウトES細胞、野生型ES細胞、rescue ES細胞の間でbisulfite sequencingにより解析した。その結果、Ces1発現により、Dppa3/Stella遺伝子の発現制御領域のメチル化が解除されることが示された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
これまでの研究により、Ces1ノックアウトES細胞の基本的な性質の解析がほぼ終了し、CES1の結合部位や他の蛋白性因子との結合を解析するところまで進んでいる。
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| 今後の研究の推進方策 |
これまでの検討から、Ces1遺伝子がどのようなターゲット遺伝子に作用しているかを明らかにすることが重要と考えられる。Zinc finger motifを有する蛋白質であるCES1はDNAに結合して機能していると考えられ、そのターゲット遺伝子をChiP sequencingにより解析する予定である。また、CES1蛋白は他のヒストン修飾、DNAメチル化制御蛋白とも相互作用している可能性が考えられ、その観点からの検討も進める予定である。
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