| 研究課題/領域番号 |
25460423
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| 研究機関 | 東邦大学 |
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研究代表者 |
深澤 由里 東邦大学, 医学部, 講師 (90392331)
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| 研究分担者 |
石川 由起雄 東邦大学, 医学部, 客員講師 (30276894)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | 大腸がん / 内皮細胞 / 脈管侵襲 |
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| 研究実績の概要 |
過去の研究代表者の病理学的解析により、大腸がんの浸潤先進部におけるMMP7発現の程度が、血行性転移の代表である肝転移の有無とリンパ節転移の有無に強く関わることを見出していることから、大腸がん細胞の産生するMMP7が血管内皮細胞にどのように影響するのかをin vitroで観察することを目的として、大腸がん細胞株5株においてMMP7発現程度を確認した。具体的には、DLD-1, Colo320DM, Colo201, LoVo, WiDrを購入し、RIPA Bufferにてタンパクを抽出した。MMP7の発現をWestern blotting法にて部分的に確認できたが、バンドが明確に判断できず、現在Western Blotting法の条件の検討中である。
ヒト内皮細胞株であるHUVECにMMP7およびTGF-betaを添加し、48時間後、96時間後の細胞を回収しRIPA Bufferにてタンパクを抽出した。形態的に内皮細胞の結合性の低下が示唆されたことから、Western Blotting法にてVE-cadherinの発現変化を確認中である。
東邦大学医療センター大森病院の大腸がん症例から、術前治療の施行されていない結腸・直腸切除症例の選出とその臨床データ（再発の有無、治療経過、予後など）の収集中である。
血管と癌の関連を整理するため、乳房Paget病における血管増生とVEGFA, bFGFの発現を免疫組織化学的に観察し、血管の数の増加および血管の拡張と、腫瘍細胞におけるVEGFA, bFGFの発現が確認された。この様な現象が大腸がんの浸潤部でも起きている可能性もあり、今後大腸がんで検討する予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
産休・育休から復帰してまもなくは実験ができる状況ではなかった。
細胞株のコンタミネーションが発覚し購入し直したこともあり、実験が遅れてしまった。
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| 今後の研究の推進方策 |
細胞株はそろっており、細胞を新たにおこしタンパクをとりなおしてWestern Blottin法をやり直す。
大腸がん切除検体の選択については、臨床医と相談し、臨床データの整理が円滑に進むようにする。
準備が終了している乳房Paget病における腫瘍のVEGFA, bFGFの発現の程度と血管の増生・拡張の病態を確認し、同様の変化が大腸がんの浸潤先進部でも起こっているのか、その病態が脈管侵襲の亢進に関わるのかを解析する。それらの結果を in vitroで再現できるのか、他の分子の動きがあるかどうかを確認し、再び大腸がん切片の検討に反映させる。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
産休・育休復帰後まもなくは、実験ができる状況ではなく、実験が遅れてしまった。また細胞培養の手技が煩雑な細胞株があり（Colo320DM, Colo201)、細胞の回収やタンパク抽出に時間がかかってしまったことから、タンパクの発現評価に時間がかかってしまい、購入予定であった抗体の選出までにいたらなかった。
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| 次年度使用額の使用計画 |
MMP7, VE-cadherin, VEGFA, bFGFなど中心となる抗体に関しては、複数の会社の抗体を購入し、迅速に解析が進むように努める。
細胞培養は、回収する細胞量を増加させ、良質で濃度の高いタンパクを抽出するkitを購入し、迅速に解析が進むように努める。
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