E型肝炎ウイルス感染性クローンを用いた増殖機構および病原性の解析

2015 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 25460580
• 研究機関: 国立感染症研究所
• 研究代表者: 石井 孝司 国立感染症研究所, その他部局等, その他 (40280763)
• 研究分担者: 李 天成 国立感染症研究所, その他部局等, 研究員 (90370957)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2016-03-31
• キーワード: E型肝炎ウイルス / 複製機構 / 病原性 / レプリコン / プロテアーゼ

研究実績の概要

E型肝炎ウイルス(HEV)の細胞での増殖系が近年確立されたが、一方でウイルス感染に関与する宿主側因子や、ウイルスの細胞内複製機構についてはいまだに解析が進んでいない。我々は本研究で、感染性HEVクローンの取得と、これを用いてルシフェラーゼをレポーター遺伝子として持つレプリコンの構築に成功した。これらの感染性クローンとレプリコンを用いて、HEVの複製増殖機構や病原性発現機構の解明を目指した。
HEVの非構造蛋白であるORF1全長及びプロテアーゼと推定される領域を、コムギ胚芽無細胞蛋白発現系で発現させたところ、ORF1からはプロテアーゼ活性が検出できた。プロテアーゼの活性中心残基に変異を導入すると複製しなくなることも明らかとなり、プロテアーゼ活性はHEVの増殖に必須であることが示されたが、ORF1のプロセシングは観察されなかったことから、本プロテアーゼは宿主に働いている可能性があることが示唆された。
レプリコンを用いて複製増殖を阻害する薬剤のスクリーニングを行った。複数の化合物ライブラリから合計3000以上の化合物のスクリーニングを行い、強い活性を持つ化合物17を同定した。それらの一部は共通の生理活性を有することが判明した。これらの作用機序がHEV複製増殖に及ぼす影響について検討を進めている。

研究成果

• [雑誌論文] A Case of Chronic Hepatitis E Infection in a Persistently Immunosuppressed Patient Unable to be Eliminated after Ribavirin Therapy. (2016)
  • 著者名/発表者名: Miyoshi M., Kakinuma S., Tanabe Y., Ishii K., Li T.C., Wakita T,, Tsuura Y., Watanabe H., Asahina Y., Watanabe M. and Ikeda T.
  • 雑誌名: Internal Medicine 巻: in press ページ: in press
  • 査読あり
• [雑誌論文] Ferret Hepatitis E Virus Infection Induces Acute Hepatitis and Persistent Infection in Ferrets. (2016)
  • 著者名/発表者名: Li T.C., Yang T., Yoshizaki S., Ami Y., Suzaki Y., Ishii K., Kishida N., Shirakura M., Asanuma H., Takeda N. and Wakita T.
  • 雑誌名: Veterinary Microbiology 巻: in press ページ: in press
  • DOI: 10.1016/j.vetmic.2015.11.014
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] The high prevalence of hepatitis E virus infection in wild boars in Ibaraki Prefecture, Japan (2016)
  • 著者名/発表者名: Motoya T., Nagata N., Komori H., Doi I., Kurosawa M., Keta T., Sasaki N and Ishii K.
  • 雑誌名: Journal of Veterinary Medical Science 巻: 77 ページ: 1705-1709
  • DOI: 10.1292/jvms.15-0173
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] A型肝炎ウイルス (2016)
  • 著者名/発表者名: 石井孝司
  • 雑誌名: 臨床検査 巻: in press ページ: in press
• [雑誌論文] Seroepidemiological study of hepatitis B virus markers in Japan (2015)
  • 著者名/発表者名: Kiyohara T., Ishii K., Sugiyama M., Mizokami M. and Wakita T.
  • 雑誌名: Vaccine 巻: 33 ページ: 6037-6042
  • DOI: 10.1016/j.vaccine.2015.08.034
  • 査読あり
• [雑誌論文] Epidemiology of domestically-aquired hepatitis E virus infection in Japan: assessment of the nationally reported surveillance data, 2007-2013 (2015)
  • 著者名/発表者名: Kanayama A., Arima Y., Tamagishi T., Kinoshita H., Sunagawa T., Yahata Y., Matsui T., Ishii K., Wakita T. and Oishi K.
  • 雑誌名: Journal of Medical Microbiology 巻: 64 ページ: 752-758
  • DOI: 10.1099/jmm.0.000084
  • 査読あり
• [雑誌論文] Generation of hepatitis E virus-like particles of two new genotypes G5 and G6 and comparison of antigenic properties with those of known genotypes (2015)
  • 著者名/発表者名: Li T.C., Kataoka M., Takahashi K., Yoshizaki S., Kato T., Ishii K., Takeda N., Mishiro S. and Wakita T.
  • 雑誌名: Veterinary Microbiology 巻: 178 ページ: 150-157
  • DOI: 10.1016/j.vetmic.2015.04.020
  • 査読あり
• [雑誌論文] Epidemiological and genetic analysis of a 2014 outbreak of hepatitis A in Japan (2015)
  • 著者名/発表者名: Ishii K., Kiyohara T., Yoshizaki S., Kawabata K., Kanayama A., Yahata Y., Takahashi T., Kinoshita H., Saitou T., Sunagawa T., Oishi K., Uema M., Noda M. and Wakita T.
  • 雑誌名: Vaccine 巻: 33 ページ: 6029-6036
  • DOI: 10.1016/j.vaccine. 2015.04.061
  • 査読あり
• [雑誌論文] Construction and characterization of an infectious cDNA clone of rat hepatitis E virus (2015)
  • 著者名/発表者名: Li T.C., Yang T., Yoshizaki S., Ami Y., Suzaki Y., Ishii K., Haga K., Nakamura T., Ochiai S., Wakita T. and Johne R.
  • 雑誌名: Journal of General Virology 巻: 96 ページ: 1320-1327
  • DOI: 10.1099/vir.0.000072
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Establishment of Hepatitis E Virus Infection-Permissive and -Nonpermissive Human Hepatoma PLC/PRF/5 Subclones (2015)
  • 著者名/発表者名: Shiota T., Li T.C., Yoshizaki S., Kato T., Wakita T. and Ishii K.
  • 雑誌名: Microbiology and Immunology 巻: 59 ページ: 89-94
  • DOI: 10.1111/1348-0421.12219
  • 査読あり
• [雑誌論文] A型肝炎の分子疫学的解析 (2015)
  • 著者名/発表者名: 石井孝司
  • 雑誌名: 肝胆膵 巻: 71 ページ: 983-989
• [雑誌論文] 生肉食とE型肝炎 (2015)
  • 著者名/発表者名: 石井孝司、今川稔文
  • 雑誌名: 日本臨床 巻: 73 ページ: 693-698
• [雑誌論文] A型肝炎ウイルスのウイルス学的特徴 (2015)
  • 著者名/発表者名: 石井孝司
  • 雑誌名: 日本臨床 巻: 73 ページ: 576-583
• [雑誌論文] A型肝炎ウイルス（HAV）の疫学 (2015)
  • 著者名/発表者名: 鈴木哲朗、石井孝司
  • 雑誌名: 日本臨床 巻: 73 ページ: 571-575
• [雑誌論文] A型肝炎 (2015)
  • 著者名/発表者名: 石井孝司
  • 雑誌名: 救急医学 巻: 39 ページ: 1434-1437
• [学会発表] Neutralizing antibody induction by vaccination of cell culture-generated hepatitis C virus particles in non-human primate model (2015)
  • 著者名/発表者名: 1.Yokokawa H., Higashino A., Suzuki S., Suzuki T., Akari H., Kato T., Ishii K. and Wakita T.
  • 学会等名: 第38回日本分子生物学会年会・第88回日本生化学会合同大会
  • 発表場所: 神戸市
  • 年月日: 2015-12-01 – 2015-12-04
• [学会発表] A reverse genetic system to explore the function of rat hepatitis E virus ORF4 (2015)
  • 著者名/発表者名: Li T.C., Yang T., Ami Y., Suzaki Y., Yoshizaki S., Ishii K., Haga K., Nakamura T., Ochiai S., Takeda N.. Johne R. and Wakita T.
  • 学会等名: 第63回日本ウイルス学会
  • 発表場所: 福岡市
  • 年月日: 2015-11-22 – 2015-11-24
• [学会発表] The validation study of hepatitis E virus receptor candidate (2015)
  • 著者名/発表者名: Shiota T., Li T.C., Yoshizaki S., Nishimura Y., Shimizu H., Shimojima M., Saijo M., Wakita T. and Ishii K.
  • 学会等名: 第63回日本ウイルス学会
  • 発表場所: 福岡市
  • 年月日: 2015-11-22 – 2015-11-24
• [学会発表] Immunogenicity of Booster Vaccination with an Aluminum-absorbed Hepatitis A Vaccine after Primary Immunization with Aluminum-free Japanese Hepatitis A Vaccine (2015)
  • 著者名/発表者名: Fukushima S., Nakano T., Kiyohara T., Ishii K. and Hamada A.
  • 学会等名: 9th Vaccine & ISV Congress
  • 発表場所: Seoul, Republic Of Korea
  • 年月日: 2015-10-18 – 2015-10-20
  • 国際学会
• [学会発表] A型肝炎ワクチン(エイムゲン®とHAVRIX®)の互換性に関する研究 (2015)
  • 著者名/発表者名: 福島慎二、清原知子、石井孝司、中野貴司、濱田篤郎
  • 学会等名: 第18回日本渡航医学会学術集会
  • 発表場所: 名古屋市
  • 年月日: 2015-07-25 – 2015-07-26
• [学会発表] 本邦におけるB型肝炎流行状況の調査 (2015)
  • 著者名/発表者名: 清原知子、石井孝司、脇田隆字
  • 学会等名: 第51回日本肝臓学会総会
  • 発表場所: 熊本市
  • 年月日: 2015-05-21 – 2015-05-22