| 研究課題/領域番号 |
25460882
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 研究機関 | 科学警察研究所 |
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研究代表者 |
武藤 淳二 科学警察研究所, 法科学第一部, 主任研究官 (80432186)
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| 研究分担者 |
酒井 洋樹 岐阜大学, 応用生物科学部, 准教授 (40283288)
佐々 悠木子 東京農工大学, (連合)農学研究科(研究院), 助教 (20582464)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | 網羅的検出法 / ウイルス / 遺伝子 / PCR / シークエンス / 法医学 / 微生物 |
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| 研究概要 |
これまで病原ウイルスの同定は、症状や病態からウイルスを推定し、推定されたウイルス種を検出するELISAやPCRなどの検査を各種組み合わせて確認した後、PCRで増幅できた遺伝子断片の塩基配列を決定して行っているが、多大な時間と労力を要するのが現状である。そこで本研究では、近年開発された網羅的ウイルス遺伝子検出法を応用し、法医学的試料からウイルスを迅速に同定するシステムを構築する。
今年度、大学の獣医病理学教室で剖検に供された猫から咽頭および鼻腔のぬぐい液を採取し、培養細胞を用いてウイルスを分離した後、ぬぐい液およびウイルス分離材料を用いて網羅的ウイルス遺伝子検出法を行った。組織診断では肺胞上皮細胞において核内封入体および多核巨細胞化が観察され、病理学的には猫ヘルペスウイルス感染症が疑われたが、網羅的ウイルス遺伝子検出法では猫ヘルペスウイルスと猫カリシウイルスが検出された。
これらを確認するため、ヘルペスウイルスまたはカリシウイルスに特異的なプライマーを用いてPCRを行ったところ、咽頭由来のウイルス分離材料からカリシウイルス遺伝子が増幅され、咽頭および鼻腔のすべての材料からヘルペスウイルス遺伝子が増幅された。さらに、増幅された遺伝子断片の塩基配列をシークエンスしたところ、NCBI（全米バイオテクノロジー情報センター）の相同性検索により猫ヘルペスウイルスおよび猫カリシウイルスであることが確認された。
今後、組織から抽出した材料を用いて網羅的ウイルス遺伝子検出法を検証するほか、実施例を増やして本技術の精度を高めたいと考えている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
当初の計画は、病理解剖に供された動物からウイルス分離用の材料を採取し、培養細胞を用いてウイルスを分離し、ウイルス分離材料を用いて網羅的ウイルス遺伝子検出法を行ってウイルス遺伝子を検出できるか検証することであり、実際、猫から採取した咽頭および鼻腔のぬぐい液からウイルスを分離した。また、網羅的ウイルス遺伝子検出法により鼻腔ぬぐい液の材料から猫ヘルペスウイルス遺伝子、咽頭由来のウイルス分離材料から猫カリシウイルス遺伝子の検出に成功しており、本研究はおおむね順調に進展している。
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| 今後の研究の推進方策 |
動物組織から抽出した材料を用いて網羅的ウイルス遺伝子検出法を検証するほか、手順の簡略化や迅速化などを検討する。また、材料の種類、動物種および検体数を増やし、多様なサンプルに対応できるよう必要に応じて変更を加え、法医学的試料に最適な方法を確立していく。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
平成25年度は入手できたサンプル数が予想より少なく、実験が予定していた回数に満たなかった。それに伴って実験に用いる試薬等消耗品の購入も少なくなったため、次年度使用額が生じた。
平成26年度はサンプルの収集に努め、平成25年度より実験数を増やす予定である。また、最終年度に計画している動物実験の予備実験も行う予定である。
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