研究課題
In silico p53結合配列解析とクロマチン免疫沈降産物の次世代シーケンサー解析（ChIP-seq）により絞り込まれたゲノム上のp53結合領域近傍に存在する約150のlincRNA（大型遺伝子介在非コードRNA，lincRNA）の内，22のlincRNAがp53ファミリーにより発現誘導され，これらのlincRNAのp53結合部位配列を用いたレポーターアッセイを行ったところp53活性化により転写活性の上昇が認められた．これらの結果から，複数のlincRNAがp53ファミリーの標的となっていることが明らかとなった．これらのlincRNAの中で，３つのp53ファミリーすべてで強く発現誘導が認められる3つのlincRNAについて肝癌細胞Hep3Bおよび大腸癌細胞DLD1においてsiRNAを用いたノックダウンを行い，アデノウイルスによりp53導入時のアポトーシス誘導能をフローサイトメトリー，Capspase-3活性の定量およびウエスタンブロットによるPARP-1の断片化を用いて測定した．その結果，２つのlincRNAではそのノックダウンによりp53によるアポトーシス誘導が減弱した一方，もう１つのlincRNAではアポトーシスの増強が認められた．更にp53正常型である大腸癌細胞RKOおよび骨肉腫細胞U2OSにおいてNutlin-3a処理により内因性p53を活性化した系においても，同様の結果が得られた．これらのlincRNAがどのように機能してp53誘導アポトーシスに影響を与えているのかを調べるため，マイクロアレイを用いて網羅的な発現データを取得し，現在，得られたデータの解析を進めているところである．
3: やや遅れている
これまで計画通り順調に研究を進めていたが，研究計画の最終項目であるp53標的lincRNAの機能解析に少し時間を要している．このため補助事業期間延長の申請を行い，残りの解析を進めているところである．
lincRNAノックダウン時のマイクロアレイによる網羅的発現データの解析を速やかに行い，その機能について明らかにしていく．
研究計画最終項目であるp53標的lincRNAの機能解析に少し時間を要しており，研究計画延長の申請を行ったため．
p53標的lincRNAの機能解析を引き続き行う．
すべて 2015
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Cancer Science
巻: 106 ページ: 1033-40
10.1111/cas.12713
Journal of Gastoroenterology
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