| 研究課題/領域番号 |
25460934
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(C)
|
| 研究機関 | 北里大学 |
|---|
研究代表者 |
五艘 行信 北里大学, 医学部, 准教授 (20112659)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2017-03-31
|
| キーワード | ムチン / 糖鎖 / グライコーム / 胃粘膜 / 粘液 / 質量分析計 |
|---|
| 研究概要 |
当初の計画に基づいて，マウス胃の体部および幽門部からムチンを抽出，精製後，糖鎖を調整し，両者の違いについて質量分析計を用いて詳細に解析した。
具体的には，C57BL/6，オス，７週齢のマウスの胃粘膜をトライトンX-100およびジチオスレイトールを含むグアニジン塩酸溶液で抽出し，抽出液をゲルろ過カラム，塩化セシウム密度勾配超遠心により処理し，精製ムチンを得た。エタノール沈殿で脱塩後，水素化ホウ素ナトリウムの存在下でアルカリ分解して糖鎖を得，イオン交換カラムにより，中性糖鎖と酸性糖鎖に分画した。得られた糖鎖を，完全メチル化後，マトリックス支援飛行時間型質量分析計(MALDI-TOF-MS)を用いて解析した。
その結果，胃体部と幽門部では，胃ムチンの中性糖鎖に，サイズ分布の違いが見られることがわかった。しかし，糖鎖分子種には大きな違いは認められなかった。一方，酸性糖鎖については，胃体部にほとんど認められないのに対し，幽門部では有意に多い糖鎖が認められた。構造については，現在解析中である。
もう一つの予定項目であるムチン糖鎖プローブについては，蛍光標識糖鎖の調製法の予備的な検討を行った。未だ確立はしていないが，調製法について，今後に期待を抱かせる結果が出つつある。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
当初の計画における目標が，おおむね達成された。
|
| 今後の研究の推進方策 |
得られた部位特異的な糖鎖について，更なる詳細な構造解析を行う。
ムチン糖鎖プローブの作成については，調製法を確立する。
|
| 次年度の研究費の使用計画 |
極めて少額のため，更なる物品の購入はしなかった。
物品費として使用する。
|
