| 研究課題/領域番号 |
25460952
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| 研究機関 | 九州大学 |
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研究代表者 |
中村 和彦 九州大学, 大学病院, 助教 (00274449)
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| 研究分担者 |
伊原 栄吉 九州大学, 大学病院, 助教 (80612390)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | 炎症性腸疾患 / smad7 / TGF-beta |
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| 研究実績の概要 |
BALB/cマウスより脾臓を摘出し、単核球を分離した。CD4+ T細胞単離キットでCD4+ T細胞を分離した。CD4+ T細胞を固相化した抗CD3抗体と可溶性抗CD28抗体で刺激、指摘濃度のIL-1β、IL-6、IFN-γ、TNF-α、TGF-βを添加し、1時間後、5時間後に細胞を採取しlysateを作成した。LysateをSDS-PAGEで電気泳動し、メンブレンに転写した。抗マウスsmad7抗体でウエスターンブロットを行ない、smad7蛋白の発現レベルを解析した。内因性コントロールとしてβ-actinを用いた。
Smad7発現レベルは、サイトカイン添加1時間後、コントロールとの比較で、IL-1β、IL-6、IFN-γ、TNF-α、TGF-βの添加によりそれぞれ21.4％、90.2％、32.4％、60.3％、108.8％となった。IL-1β、IFN-γ、TNF-αによりsmad7発現の著名な抑制が認められた。また、smad7発現レベルは、サイトカイン添加5時間後、コントロールとの比較で、IL-1β、IL-6、IFN-γ、TNF-α、TGF-βの添加によりそれぞれ27.6％、93.4％、28.0％、13.5％、139.6％となり、IL-1β、IFN-γ、TNF-αによりsmad7発現の著名な抑制が認められると共に、TGF-βによりsmad7発現亢進が認められた。以上より、IL-1β、IFN-γ、TNF-αなどのproinflammatory cytokineがsmad7発現抑制因子、TGF-βがsmad7発現促進因子である事が示された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
当初、抗smad7抗体によるウエスターンブロットの条件設定が困難であったが、実験系が確立された。マウスCD4+ T細胞におけるsmad7発現抑制因子とsmad7発現促進因子を同定できた。
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| 今後の研究の推進方策 |
大腸炎誘導エフェクターT細胞の制御性T細胞に対する感受性の回復を目指した治療法の開発を目指して、今後、更にマウスCD4+ T細胞においてIL-10などの抑制性サイトカインにsmad7発現抑制作用がないかを検討する。
マウスCD4+ T細胞で認めたsmad7発現抑制因子とsmad7発現促進因子が、ヒトCD4+ T細胞においても同様の作用を有するか検討する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
残高が少なく必要な物品の購入には足りなかったため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
次年度の予算に加えて、必要な物品等を購入する。
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