| 研究課題/領域番号 |
25461153
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 研究機関 | 新潟大学 |
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研究代表者 |
田澤 立之 新潟大学, 医歯学総合病院, 准教授 (70301041)
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| 研究分担者 |
中田 光 新潟大学, 医歯学総合病院, 教授 (80207802)
石井 晴之 杏林大学, 医学部, 講師 (30406970)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | 肺胞蛋白症 / GM-CSF / 抗GM-CSF自己抗体 / 気管支肺胞洗浄液 |
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| 研究概要 |
本研究では，GM-CSF吸入治療を受けた自己免疫性肺胞蛋白症患者（APAP)患者の改善の機序を明らかにすることを目的とする．患者のCT画像，気管支肺胞洗浄液（BALF）や血清などの患者検体，培養細胞を用いた検討よりアプローチする．GM-CSF吸入治療を受けた患者のCTを陰影の強度および広がりからスコアリングして検討したところ，CT gradeは，血清マーカー，肺機能所見，PaO2と有意に相関し，その増減は治療効果と相関することが確認された．APAP患者の抗GM-CSF抗体の肺局所での分布を調べるため，]APAP患者のBALFおよび血中の，GM-CSFと抗GM-CSF抗体が結合した複合体の定量を，ポリクローナル抗体を用いたサンドイッチELISA法で試みた．その結果，BALF中の複合体の濃度は，血清中のそれよりはるかに高いことが分かり，血中の抗体は，肺内に移行して，II型肺胞上皮が作るGM-CSFとすぐに結合すると考えられ，吸入GM-CSFは両者の平衡に影響を与えると考えられた．吸入治療に用いたGM-CSFは，酵母由来ないし大腸菌由来のヒトリコンビナントGM-CSFで，ヒト細胞で産生されるGM-CSFに比べ，糖鎖がほとんどない点で異なる．糖鎖に富む哺乳動物細胞のCHO由来のヒトリコンビナントGM-CSFと酵母由来ないし大腸菌由来のGM-CSFを用いて，培養細胞に対する生理活性を比較したところ，CHO由来GM-CSFは，細胞の増殖や生存をより強く促進することが判明し，糖鎖が，GM-CSFのとりこみや分解に関係する可能性が考えられた．
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
新規GM-CSF治療例の臨床データの蓄積も徐々にすすんでおり，より多くの例での解析が可能となってきている．画像評価のスコアリングシステム設定の評価が進んでいる．気管支肺胞洗浄液検体および血清検体も順調に蓄積が進行している．各種マーカーの測定に加えて，GM-CSF―抗GM-CSF抗体複合体の定量についてサンドイッチELISA法で評価をこころみ，気管支肺胞洗浄液中の複合体の量が多いことが明らかになった． GM-CSFの生理機能について，糖鎖修飾の関連についての解析が進み，細胞の増殖や生存を低濃度で促進することが示されている．以上のように，各領域で新知見が得られており概ね順調に進展している．
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| 今後の研究の推進方策 |
①画像所見の解析：本年度はより精細な定量的な検討を試みるため，GM-CSF 吸入治療を受けた本症患者のCT 画像のDICOM データを用意して，CT 画像の定量的解析を試みる. 解析結果で有意の結果が出ない場合に，以下のアプローチを試みる．GM-CSF 吸入治療研究の予後の解析では，治療前％VC と追加治療の要否との関係が示唆された．治療前のCT スコアに関しては，奏効例あるいは予後不良例との有意の相関はみられていないが，線維化所見の評価方法を検討し，治療効果・予後との関係を調べ，血清やBALF などの分子マーカーとの関係も解析する．
②PAP患者検体の分子マーカーの解析：前年度に引き続き，GM-CSFおよび抗GM-CSF抗体のstoichiometryに関する検討を進める．また，肺胞サーファクタントのクリアランスに，気道上皮細胞が関係する可能性も考えられ，BALF検体での腫瘍関連マーカーや上皮関連マーカーとの関連を検索する．
③培養細胞でのGM-CSF および抗体刺激の解析：前年度に引き続き，GM-CSF，抗GM-CSF 抗体，IL-17等各種サイトカインと の関係のin vitro での検索を行う．さらに，大腸菌由来GM-CSF 製剤，酵母由来GM-CSF 製剤，CHO 由来GM-CSF 製剤の間での効果の差と糖鎖修飾との関連についてさらに詳しい検討を計画する．
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| 次年度の研究費の使用計画 |
気管支肺胞洗浄液の解析について，平成25年度は，GM-CSFおよび抗GM-CSF抗体の量的解析を中心にすすめられ次年度上皮マーカー，腫瘍マーカー等についての検索を進める予定でそれらの測定に係る費用が必要となった．またヒトリコンビナントGM-CSF製剤の糖鎖に関する解析が進み，糖鎖処理の解析に係る費用が必要となった．
①PAP患者の気管支肺胞洗浄液におけるサイトケラチン，コルニュリンなどの上皮細胞マーカー，腫瘍マーカーの定量および，補正に関する評価実験に使用する． ②抗GM-CSF抗体およびGM-CSFの量的解析のためのELISA法測定実験に使用する．③ヒトリコンビナントGM-CSF製剤の糖鎖の影響の評価のための培養細胞実験に使用する．
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