| 研究課題/領域番号 |
25461164
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| 研究機関 | 東北薬科大学 |
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研究代表者 |
大野 勲 東北薬科大学, 薬学部, 教授 (00250762)
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| 研究分担者 |
山内 広平 岩手医科大学, 医学部, 教授 (20200579)
曽良 一郎 神戸大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (40322713)
伊左治 知弥 東北薬科大学, 薬学部, 助教 (80433514)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | アレルギー・ぜんそく / ストレス / オピオイド受容体 / 免疫学 / 遺伝子 |
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| 研究実績の概要 |
１．ヒト末梢血白血球からのIL-4産生に及ぼすμ-オピオイド受容体（MOR）リガンドの増強効果とΜΟR遺伝子の４つの一塩基多型（rs1799971AG、rs2075572CG、rs599548AG、rs558025AG）との相関：喘息患者（７４名）の末梢血から分離した単核球およびCD4+ T細胞からのPMA/ionomycinまたは抗CD３／CD２８抗体の刺激によるIL-4産生に対するDAMGO（MORリガンド）の効果を検討した。個々の喘息患者では、IL-4産生に対するDAMGOの増強効果は明らかではなかった。喘息患者群では、男性群および女性群別に解析しても、いずれの細胞およびいずれの刺激でも、DAMGOによる有意な増強はなかった。喘息患者群でのgenotype別の解析によるDAMGOのIL-4産生に対する効果も明確ではなかった。今後、症例数を増やした上で解析を実施する。
２．喘息患者における臨床データとΜΟR遺伝子の一塩基多型との関連：２６年度は新たに111名の喘息患者のデータを収集開始した。昨年度に引き続き300名の喘息患者データの解析により、（１）rs599548 A alleleの患者では、喫煙に関係なく、小児発症例で、また女性患者で、有意に気道過敏性は亢進し一秒量・一秒率も小さかった。（２）rs1799971 A alleleの患者では、肥満に関係なく、好酸球とIgEが有意に高かった。（３）rs2075572 G alleleの患者では、肥満に関係なく、女性で一秒量が有意に小さかった。今後、症例数を増やした上、関連を確認する。
３．ストレス問診票によるストレススコアのデータ収集：喘息患者のストレス問診票を６９例から回収したが、ストレスと有意な相関を示す臨床データは得られていない。今後例数を増やす必要がある。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
登録喘息患者が昨年度よりも増えたもののデータが全部揃わないのは、患者の受診状況に大きく影響されているためである。その結果、臨床データからみた喘息重症度に相関するΜΟR遺伝子一塩基多型について結論を出すに至っていない。ストレス問診票の回収も同様の理由で遅れており、ストレスの程度と臨床データ、ΜΟR遺伝子一塩基多型との相関についても状況は同じである。喘息患者末梢血白血球からのIL-4産生に対するMOR刺激による産生増強をみるための採血は、患者の受診状況に大きく影響される。そのためデータの蓄積が遅れており、MORリガンドの増強効果に関連するΜΟR遺伝子一塩基多型について結論を出すに至っていない。また、健常人白血球ではIL-4産生増強効果を示したMORリガンドが、喘息患者白血球では明らかな増強効果を示さなかった。このことも、MORリガンドの増強効果に関連するΜΟR遺伝子一塩基多型を決定付けることができない理由となっている。結果として、２６年度予定したマウスT細胞への一塩基多型遺伝子の導入実験を進めることができなかった。健常者のデータ収集が進まなかったのは、喘息患者のデータ収集に時間を費やされたためである。
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| 今後の研究の推進方策 |
健常者のデータについては、大野（研究代表者）が東北薬科大学においてボランティアを募って収集する。そのための倫理審査を既に同大学倫理委員会に申請し認可を得ている。患者および健常者のデータ収集および４つの一塩基多型のgenotype決定は、倫理事項を遵守しながら積極的に進め、それらのデータ解析により喘息の増悪や発症に関連するΜΟR遺伝子一塩基多型の同定を目指す。ヒト末梢血白血球からのIL-4産生に対する効果を、モルヒネなど、DAMGO以外の他のMORリガンドを用いて検討し、増強効果がより明らかな条件下で、増強効果に関与するΜΟR遺伝子一塩基多型を明らかにしていく。ヒト白血球を用いた実験と並行して、喘息モデルマウスの脾細胞を用いて、IL-4産生増強に関与するΜΟR遺伝子一塩基多型の同定を目指す実験を開始する。具体的には、MORノックアウトマウスを感作し（感作が成立することは以前の実験で確認済み）、その脾細胞に一塩基多型を有するΜΟR遺伝子を導入する。MORリガンドによる刺激時の細胞内シグナル伝達やIL-4産生が増強される一塩基多型を決定する。ストレス問診票によるストレススコアの収集を積極的に進め、ストレスと喘息重症度、一塩基多型の関係を明らかにしていく。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
喘息重症度やストレススコアを用いた解析および末梢血白血球からのIL-4産生のMORリガンドによる増強効果の解析が、例数不足のため進まなかったため、喘息悪化に関わるMOR遺伝子一塩基多型の候補を決定することができなかった。その結果、MOR遺伝子欠損マウスリンパ球への候補一塩基多型をもつMOR遺伝子の導入実験を開始できなかった。そのため、MOR遺伝子欠損マウスの繁殖関係の実験費用を使用しないで終了したため次年度使用額が生じた。
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| 次年度使用額の使用計画 |
喘息患者の臨床データや末梢血白血球を使用する実験と並行して、MOR遺伝子一塩基多型のMOR遺伝子欠損マウスリンパ球への導入実験を実施するために使用する。具体的には、MOR遺伝子欠損マウスと抗原特異的T細胞受容体発現マウスを交配したマウスの繁殖およびMOR遺伝子cDNA導入ベクターの作成、MOR遺伝子の発現と機能の確認などの実験に使用する。
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