| 研究課題/領域番号 |
25461227
|
|---|
| 研究機関 | 自治医科大学 |
|---|
研究代表者 |
長田 太助 自治医科大学, 医学部, 教授 (40393194)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2017-03-31
|
| キーワード | 腎間質線維化 / 腎尿細管 / アポトーシス / オートファジー / AMPキナーゼ |
|---|
| 研究実績の概要 |
本研究においては、腎臓間質線維化が起きる時の腎尿細管におけるAMPキナーゼの役割について検討している。以前、AMPキナーゼ(AMPK)がオートファジーやアポトーシスを制御することを以前我々は報告したが（Nagata D. Hypertens Res 32:133;2009）、前回の基盤研究から今回の研究にかけて、AMPキナーゼの優性阻害体dominant negative (dn)と恒常活性化体constitutively active (ca)を尿細管特異的発現しうる遺伝子改変マウス(Pax8-dnAMPK, Pax8-caAMPK)を開発した。これらの遺伝子改変マウスを使い、片側尿管結紮の後、腎臓で発現が増加する遺伝子profileを解析するとともに、尿細管におけるオートファジーとアポトーシスの程度を評価し、腎間質線維化におけるAMPKの役割を検討している。尿管結紮後5日目では対照と比べdnでは間質線維化が増強し、caではやや減弱していたが、8日目ではどの群でも間質線維化の程度が高度で有意な差を検出できなかった。更に違うタイミングでTUNEL染色やウエスタンブロット法でPARP cleavageの定量を実施する予定である。しかし研究代表者の長田が獨協医科大学の准教授から自治医科大学の教授で異動したことにより、様々なステップで実験動物の自治医大での再準備に時間がかかり、相当の遅れが生じた。現在、ようやく実験用の遺伝子改変動物が揃い、実験再開に向けて準備中である。したがってこの課題は補助事業期間を延長して実施する予定である。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
１）研究代表者の長田の異動にともない大幅な遅れが生じた。自治医科大学において改めて新規扱いの遺伝子改変動物を扱った動物実験を開始する際に、研究倫理を含めて様々な手続き・審査が必要であり、なかなか再開できなかった。２）動物が老齢化して繁殖可能期間を過ぎてしまい、必要な実験動物の匹数を揃えることが不可能で、獨協医科大学で精子を採取し人工授精により動物をまた揃える必要が生じたため。
|
| 今後の研究の推進方策 |
現在、ようやく実験用の遺伝子改変動物が全系統揃った。一部、繁殖が遅い系統があるものの、順調に数を増やしている。実験再開に向けて準備中である。Pax8-rtTAの系統と、TRE-dnAMPKおよびTRE-caAMPKの2系統の交配により、Pax8-dnAMPK, Pax8-caAMPKを作成してこれを繁殖して実験用とする。昨年度から動物実験を担当する研究補助員が1名増えたので、今後in vivoの実験はそれ以前よりも順調に進むと予想される。
|
| 次年度使用額が生じた理由 |
研究代表者の長田が獨協医科大学循環器・腎臓内科の准教授から自治医科大学内科学講座の教授で異動したことにより、様々なステップで遺伝子改変動物を使っての自治医大における研究の再準備に時間がかかり、相当の遅れが生じた。その理由は主に下記の二つである。１）自治医科大学において改めて新規扱いの遺伝子改変動物を扱った動物実験を開始する際に、研究倫理を含めて様々な手続き・審査が必要であり、なかなか再開できなかったこと。２）動物が老齢化して繁殖可能期間を過ぎてしまい、必要な実験動物の匹数を揃えることが不可能で、獨協医科大学で精子を採取し人工授精により動物をまた自治医大において揃える必要が生じたこと。現在、補助事業期間を延長して、実験再開の準備中である。
|
| 次年度使用額の使用計画 |
昨年度からさらに研究補助員を1人増員し、実験業務の補佐が可能な人材の充足ができたと考える。実際にこの研究で使用するPax8-dnAMPKとPax8-caAMPKは、現在繁殖しているPax-8-rtTAとTRE-dnAMPKおよびTRE-caAMPKとの高配をしないと得られないので、最初にこれらを用意する準備を急いでいる。その後は、当初の予定通りTUNEL染色やPARP cleavageやLC3とBeclin1の定量など生化学的、組織学的な手法で実施していく予定である。
|
