神経変性疾患の新規原因蛋白ｐ６２とユビキリン２の関連と治療的蛋白分解亢進

2015 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 25461297
• 研究機関: 近畿大学
• 研究代表者: 平野 牧人 近畿大学, 医学部附属病院, 准教授 (50347548)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2016-03-31
• キーワード: p62

研究実績の概要

本研究は筋萎縮性側索硬化症(ALS)の病態を、原因蛋白p62/SQSTM1やUbiquilin2に注目してiPS細胞を用いて解明、さらに、ALS病理像に出現するような蛋白凝集を減少させることを目的とした。
これまでに患者および対照由来のiPS細胞を神経幹細胞さらに神経細胞へ分化誘導を行った。ユビキチン陽性の凝集体などが形成されるかを免疫染色で検討した結果、p62の凝集が、p62遺伝子変異陽性ALS患者由来細胞にみられた。一方孤発例では、凝集は見られるが少量であった。凝集を他のALS関連蛋白に対する抗体で染色したが、残念ながら、p62と同様オートファジーとプロテアゾームに関連するALS原因蛋白Ubiquilin2は共局在していなかった。また、最終年にはp62と関連するストレスマーカーであるNrf2やKeap1も検討したが凝集への共局在は見られなかった。
p62凝集をマーカーとして、オートファジーや酸化ストレスの改善薬により、凝集の形成抑制が可能かを検討した。その結果、オートファジーの促進薬である薬剤Xや抗酸化作用を有する薬剤Yを培養液に添加することで、p62の凝集は減少した。一方、本年度行った、抗酸化作用のあるレチノイン酸には効果がなく、オートファジー促進作用のあるバルプロ酸では細胞形態の変化などを来し、凝集の評価が困難であった。
本研究ではALSや認知症は種々の異なる原因で生じている孤発性疾患も対象としており、できるだけ多くの患者のiPS細胞を樹立し、数種のiPS細胞で確認された知見を他のiPSで確認する作業が必要であると考えられたため、引き続き、皮膚切開を伴う処置・検査をうける患者を対象に皮膚の採取と線維芽細胞の樹立を試み、7例の樹立をおこなうことができiPS作製中である。また、iPS細胞も新たに２例分(別のALS遺伝子陽性例を含む)を樹立でき、公的バンクへの供与が可能となった。

研究成果

• [雑誌論文] 日本のValosin-containing protein関連筋萎縮性側索硬化症 (2016)
  • 著者名/発表者名: 平野牧人、中村雄作、楠 進
  • 雑誌名: 臨床神経学 巻: 印刷中 ページ: e-pub
  • 査読あり
• [雑誌論文] ALSとSQSTM1 (2015)
  • 著者名/発表者名: 平野牧人
  • 雑誌名: 神経内科 巻: 82 ページ: 360-365
• [雑誌論文] VCP gene analyses in Japanese patients with sporadic amyotrophic lateral sclerosis identify a new mutation. (2015)
  • 著者名/発表者名: Hirano M, Nakamura Y, Saigoh K, Sakamoto H, Ueno S, Isono C, Mitsui Y, Kusunoki S.
  • 雑誌名: Neurobiol Aging 巻: 36 ページ: 1604.e1-6
  • DOI: 10.1016/j.neurobiolaging.2014.10.012
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] The First Nationwide Survey and Genetic Analyses of Bardet-Biedl Syndrome in Japan. (2015)
  • 著者名/発表者名: Hirano M, Satake W, Ihara K, Tsuge I, Kondo S, Saida K, Betsui H, Okubo K, Sakamoto H, Ueno S, Ikuno Y, Ishihara R, Iwahashi H, Ohishi M, Mano T, Yamashita T, Suzuki Y, Nakamura Y, Kusunoki S, Toda T.
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 10 ページ: e0136317
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0136317
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Rotigotine Transdermal Patch Improves Swallowing in Dysphagic Patients with Parkinson's Disease. (2015)
  • 著者名/発表者名: Hirano M, Isono C, Sakamoto H, Ueno S, Kusunoki S, Nakamura Y.
  • 雑誌名: Dysphagia 巻: 30 ページ: 452-426
  • DOI: 10.1007/s00455-015-9622-5
  • 査読あり
• [雑誌論文] Differential Progression of Dysphagia in Heredity and Sporadic Ataxias Involving Multiple Systems (2015)
  • 著者名/発表者名: Isono C, Hirano M, Sakamoto H, Ueno S, Kusunoki S, Nakamura Y.
  • 雑誌名: Eur Neurol 巻: 74 ページ: 237-242
  • DOI: 10.1159/000442252
  • 査読あり
• [学会発表] 孤発性筋萎縮性側索硬化症の遺伝子解析による新規変異同定とカウンセリングの問題点 (2015)
  • 著者名/発表者名: 平野牧人、中村雄作、西郷和真、阪本 光、上野周一、鈴木秀和、楠 進
  • 学会等名: 人類遺伝学会
  • 発表場所: 京王プラザホテル (東京)
  • 年月日: 2015-10-14 – 2015-10-17
• [学会発表] Analyses of the VCP gene in Japanese patients with sporadic amyotrophic lateral sclerosis identify the novel mutation that increases susceptibility to oxidative stress (2015)
  • 著者名/発表者名: Makito Hirano, MD, PhD1, 2, Yusaku Nakamura, Kazumasa Saigoh, Hikaru Sakamoto, Shuichi Ueno, Chiharu Isono, Susumu Kusunoki
  • 学会等名: The Annual Meeting of American Neurological Association
  • 発表場所: Chicago (米国)
  • 年月日: 2015-09-27 – 2015-09-29
  • 国際学会
• [学会発表] Improvement of swallowing functions by rotigotine transdermal patch in patients with Parkinson’s disease (2015)
  • 著者名/発表者名: Chiharu Isono, Makito Hirano, Hikaru Sakamoto, Shuichi Ueno, Susumu Kusunoki, Yusaku Nakamura
  • 学会等名: The Annual Meeting of American Neurological Association
  • 発表場所: Chicago (米国)
  • 年月日: 2015-09-27 – 2015-09-29
  • 国際学会
• [学会発表] Analysis of sporadic amyotrophic lateral sclerosis detects a novel VCP mutation (2015)
  • 著者名/発表者名: Makito Hirano, Yusaku Nakamura, Kazumasa Saigoh, Hikaru Sakamoto, Shuichi Ueno, MD, Susumu Kusunoki
  • 学会等名: 神経学会総会
  • 発表場所: 朱鷺メッセ (新潟市)
  • 年月日: 2015-05-20 – 2015-05-23