| 研究課題/領域番号 |
25461337
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 研究機関 | 名古屋大学 |
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研究代表者 |
押田 芳治 名古屋大学, 総合保健体育科学センター, 教授 (10169295)
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| 研究分担者 |
尾崎 信暁 名古屋大学, 学内共同利用施設等, その他 (70378082)
豊田 行康 名城大学, 薬学部, 准教授 (60103264)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | グルカゴン / Epac / グリコーゲン |
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| 研究概要 |
EpacにはEpac1とEpac2の2つのアイソフォームが存在するため、まず、肝臓におけるEpacの発現をPCR法を用いて検討した。肝臓には、Epac2のみが検出された。また、ウエスタンブロット法を行い、脳組織にはEpac2Aが、肝臓においてはEpac2Cに一致する発現を確認できた。これらの結果は、既報の結果と一致する。次に、グルカゴンがEpacを活性化するかを活性型Rap1に対するpull-down assayを行い検討した。その結果、グルカゴンは、Rap1を活性化することを示した。これらの結果は、グルカゴンは、細胞内cAMP濃度の上昇を介して、プロテインキナーゼA（以下PKA）のみならず、Epacを活性化することが示唆された。
グルカゴンは、肝臓に作用し、グリコーゲンの合成を抑制し、その分解を促進する。次に、これらの作用にEpacが寄与するかを明らかにするために、ラット初代培養肝細胞を用いて、Epacの特異的活性化剤である8-pCPT-2’-O-Me-cAMP（以下ESCA）の肝グリコーゲン蓄積に対する作用を検討した。ESCAは、0.2 M～10 Mにおいて濃度依存的に肝グリコーゲン含量を抑制した。次に、Epac阻害薬ESI-09存在下にグルカゴンを処置したところ、Rap1の活性化は抑制されたが、グルカゴンによるグリコーゲン抑制効果は全く影響を受けなかった。また、PKAの阻害薬であるKT-5720存在下でグルカゴンを処置しても、ESI-09同様に、グルカゴンによるグリコーゲン抑制効果は影響を受けなかった。これら結果から、Epacは、肝臓におけるグリコーゲン蓄積を調節することを明らかにした。しかしながら、グルカゴンによるグリコーゲン抑制作用には、PKAとEpacとの重複性が示唆された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
本年度は、Epac特異的活性化剤による検討及びEpac2Cに対するshRNAを発現するアデノウイルスベクターを作製し、実験を行う予定であった。現在、恒常活性型Epac2C及び優位阻害型Epac2Cを発現するアデノウイルスを設計及び作成に時間かかったため、研究計画が少し遅れている。
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| 今後の研究の推進方策 |
恒常活性型Epac2C及び優位阻害型Epac2Cを発現するアデノウイルスを用いて、以下の実験を行う。
１． 初代培養肝細胞を用いた実験
恒常活性型Epac2Cアデノウイルスを初代培養肝細胞に感染させ、グリコーゲン含量や中性脂肪含量への影響について検討する。また、優位阻害型Epac2Cアデノウイルスを感染させ、グルカゴン作用について検討する。
２． In vivoによる検討
グルカゴン作用には、PKAとEpacとの重複性が示唆されたため、恒常活性型Epac2Cアデノウイルスをマウス尾静脈より投与し、糖代謝、脂質代謝について検討する。
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