抗TIM-4抗体の抗炎症作用メカニズムの解明と臨床研究に向けた基盤構築

2013 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 25461503
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 研究機関: 順天堂大学
• 研究代表者: 秋葉 久弥 順天堂大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (60338316)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2016-03-31
• キーワード: 自己免疫疾患 / 抗炎症作用 / アレルギー疾患 / 細胞表面分子

研究概要

本研究は、抗TIM-4抗体の抗炎症作用機序とTIM-4分子の病理的機能を明らかにするとともに、将来の臨床研究に向けた基盤を構築するため、主に以下の４点について研究を進めている。１）抗TIM-4抗体の抗炎症作用のメカニズムの解明　2）各種免疫疾患モデルマウスに対する抗TIM-4抗体投与の治癒効果の検討　３）可溶型soluble TIM-4 (sTIM-4)の遊離メカニズムの解明　４）抗ヒトTIM-4抗体の作製と患者検体のsTIM-4検出
このうち１）抗TIM-4抗体の抗炎症作用のメカニズムについて、関節炎モデルマウスのコラーゲン誘導関節炎マウスとコラーゲン抗体誘導関節炎マウスを用いて以下のことを明らかにした。抗TIM-4抗体はT細胞、B細胞には作用せず、マクロファージから分泌される炎症性サイトカイン(IL-6, TNF-α, IL-1β)の産生抑制に働き、破骨細胞の分化成熟と骨破壊機能をも抑制させた。以前、山西らを中心に、TIM-4はペア型免疫グロブリン様レセプターであるLMIR5と結合する事を報告したが、機能・役割は不明であった。これらのマクロファージと破骨細胞はともにLMIR5を細胞表面に発現しており、関節炎においてLMIR5に何らかの作用で遊離型となったsTIM-4が結合して炎症性サイトカインの産生を増強、破骨細胞の活性化・骨破壊能を高める効果を持つものと推測している。さらなる詳細を現在、解析中である。
2）３）については、喘息モデルマウスに対する抗TIM-4抗体の効果検討を行っており、またsTIM-4遊離メカニズムについても解析は進んでいる。４）ヒトTIM-4に対し、異なる部位に結合する２種類以上の抗体(クローン)が未だ得られず、現在、引き続き抗体作製を行っている。

現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

抗TIM-4抗体の抗炎症作用のメカニズムを明らかにする研究・実験は順調に進んでいるが、抗ヒトTIM-4抗体の作製と患者検体からのsTIM-4の検出が進んでいない。患者検体からsTIM-4を検出するには、ヒトTIM-4に結合する部位が異なる２つの抗TIM-4抗体を使ってELISAを確立する必要があるが、現在、１種類の抗体しか作製に成功していない。免疫の方法やアジュバンドの変更、免疫原であるヒトTIM-4の精製度を上げる等で対応している。

今後の研究の推進方策

引き続き、卵白アルブミン誘発性喘息マウスや肺炎症のモデルマウスにおける抗TIM-4抗体投与の治療効果の確認と、抗TIM-4抗体の作用メカニズムの詳細を明かにする。また、抗ヒトTIM-4抗体を作製して、sTIM-4を検出することができるELISAを確立させ、リウマチ患者や喘息患者の血中･尿中からsTIM-4の検出を試みて疾患との相関を検討する。

次年度の研究費の使用計画

抗ヒトTIM-4抗体の作製が完了しなかった為、その先の実験に進むことが出来なかった為。
また未知のTIM-4レセプターを見つけるために必要な、有用なL5178Y細胞cDNAライブラリーが作製出来なかった為。
抗ヒトTIM-4抗体の作製は継続して行っており、有効な抗体が出来次第、可溶型ヒトTIM-4を測定することが可能なELISAを確立して、リウマチ患者や喘息患者の血中･尿中からsTIM-4の検出を試みる研究に使用する。
さらに有用なL5178Y細胞cDNAライブラリーを作製して、TIM-4が結合する未知のレセプターを同定する実験に使用する。

研究成果

• [雑誌論文] TIM-4 has dual function in the induction and effector phases of murine arthritis. (2013)
  • 著者名/発表者名: Abe Y, Kamachi F, Kawamoto T, Makino F, Ito J, Kojima Y, Moustapha Ael D, Usui Y, Yagita H, Takasaki Y, Okumura K, Akiba H.
  • 雑誌名: J Immunol 巻: 191 ページ: 4562-72
  • DOI: 10.4049/jimmunol.1203035
  • 査読あり
• [雑誌論文] Interruption of dendritic cell-mediated TIM-4 signaling induces regulatory T cells and promotes skin allograft survival. (2013)
  • 著者名/発表者名: Yeung MY, McGrath MM, Nakayama M, Shimizu T, Boenisch O, Magee CN, Abdoli R, Akiba H, Ueno T, Turka LA, Najafian N.
  • 雑誌名: J Immunol 巻: 191 ページ: 4447-55
  • DOI: 10.4049/jimmunol.1300992
• [雑誌論文] TIM-4 glycoprotein-mediated degradation of dying tumor cells by autophagy leads to reduced antigen presentation and increased immune tolerance. (2013)
  • 著者名/発表者名: Baghdadi M, Yoneda A, Yamashina T, Nagao H, Komohara Y, Nagai S, Akiba H, Foretz M, Yoshiyama H, Kinoshita I, Dosaka-Akita H, Takeya M, Viollet B, Yagita H, Jinushi M.
  • 雑誌名: Immunity 巻: 39 ページ: 1070-81
  • DOI: 10.1016/j.immuni.2013.09.014
  • 査読あり
• [雑誌論文] Monocyte-derived dendritic cells perform hemophagocytosis to fine-tune excessive immune responses. (2013)
  • 著者名/発表者名: Ohyagi H, Onai N, Sato T, Yotsumoto S, Liu J, Akiba H, Yagita H, Atarashi K, Honda K, Roers A, Müller W, Kurabayashi K, Hosoi-Amaike M, Takahashi N, Hirokawa M, Matsushima K, Sawada K, Ohteki T.
  • 雑誌名: Immunity 巻: 39 ページ: 584-98
  • DOI: 10.1016/j.immuni.2013.06.019
  • 査読あり
• [雑誌論文] TIM-3 regulates innate immune cells to induce fetomaternal tolerance. (2013)
  • 著者名/発表者名: Chabtini L, Mfarrej B, Mounayar M, Zhu B, Batal I, Dakle PJ, Smith BD, Boenisch O, Najafian N, Akiba H, Yagita H, Guleria I.
  • 雑誌名: J Immunol 巻: 190 ページ: 88-96
  • DOI: 10.4049/jimmunol.1202176
  • 査読あり
• [雑誌論文] T-cell immunoglobulin and mucin domain 3 acts as a negative regulator of atherosclerosis. (2013)
  • 著者名/発表者名: Foks AC, Ran IA, Wasserman L, Frodermann V, Ter Borg MN, de Jager SC, van Santbrink PJ, Yagita H, Akiba H, Bot I, Kuiper J, van Puijvelde GH.
  • 雑誌名: Arterioscler Thromb Vasc Biol 巻: 33 ページ: 2558-65
  • DOI: 10.1161/ATVBAHA.113.301879
  • 査読あり
• [雑誌論文] Galectin-9-mediated protection from allo-specific T cells as a mechanism of immune privilege of corneal allografts. (2013)
  • 著者名/発表者名: Shimmura-Tomita M, Wang M, Taniguchi H, Akiba H, Yagita H, Hori J.
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 8 ページ: e63620
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0063620
  • 査読あり
• [雑誌論文] Combined blockade of TIM-3 and TIM-4 augments cancer vaccine efficacy against established melanomas. (2013)
  • 著者名/発表者名: Baghdadi M, Nagao H, Yoshiyama H, Akiba H, Yagita H, Dosaka-Akita H, Jinushi M.
  • 雑誌名: Cancer Immunol Immunother 巻: 62 ページ: 629-37
  • DOI: 10.1007/s00262-012-1371-9
  • 査読あり
• [学会発表] Soluble form of TIM-4 regulates mast cell activation by binding to LMIR5 and TIM-3 (2013)
  • 著者名/発表者名: KAMACHI Fumitaka, HARADA Norihiro, NISHIYAMA Chiharu, IZAWA Kumi, KITAURA Jiro, OKUMURA Ko, MIYAKE Sachiko, AKIBA Hisaya
  • 学会等名: 第42回 日本免疫学会学術集会
  • 発表場所: 幕張メッセ、千葉市
  • 年月日: 20131211-20131213
• [学会発表] Anti-TIM-4 mAb ameliorates allergic lung inflammation by inhibiting TIM-4-mediated mast cell stimulation (2013)
  • 著者名/発表者名: F. Kamachi, M. Hara, N. Harada, Y. Katsura, Y. Kojima, K. Izawa, C. Nishiyama, K. Okumura, H. Akiba
  • 学会等名: 15th International Congress of Immunology
  • 発表場所: Milan, Italy
  • 年月日: 20130822-20130827
• [備考] 順天堂大学医学部免疫学講座ホームページ
  • URL: http://www.juntendo.ac.jp/graduate/laboratory/labo/meneki/home.html