| 研究課題/領域番号 |
25461557
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| 研究機関 | 茨城県立医療大学 |
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研究代表者 |
中山 純子 茨城県立医療大学, 公私立大学の部局等, 准教授 (30433155)
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| 研究分担者 |
有波 忠雄 筑波大学, 医学医療系, 教授 (10212648) [辞退]
岩崎 信明 茨城県立医療大学, 保健医療学部, 教授 (70251006)
野口 恵美子 筑波大学, 医学医療系, 教授 (40344882)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | 熱性けいれん / 遺伝子 / MLPA法 |
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| 研究実績の概要 |
血縁関係のない日本人熱性けいれん患者を対象として遺伝子解析を行った。前年度に引き続き、MEF2C遺伝子 (Mad box transcription enhancer factor 2, polypeptide C) についてMLPA (Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification) 法を用いて、対象患者数を増やして解析を行った。患者DNAを熱変性させ、SALSA MLPA kit (FALCO biosystems) を用いて、MEF2C遺伝子の全エクソン領域についてハイブリダイゼーション反応およびライゲーション反応を行い、PCR増幅後にABI PRISM 3100 DNA Sequencerを用いて電気泳動を行った。得られたデータをCoffalyser.Netプログラムで解析し、各エクソンのコピー数を検討した。解析を行った34名の患者ではコピー数変異は認められなかった。同様の方法で解析されたGPR98遺伝子のエクソン7についても異常は認められなかった。
GPR98遺伝子については、エクソン7以外の領域をさらに解析するため、MLPA解析のためのプローブを設計中である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
対象としているMEF2C遺伝子については追加した対象た患者も含めてダイレクトシークエンス法およびMLPA法による解析が終了しているが、GPR98遺伝子については、ダイレクトシークエンス法による解析は終了しているものの、MLPA法による解析はプローブの作成が終了していないためエクソン7のみしか終了できていない。
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| 今後の研究の推進方策 |
昨年までに行われたMEF2C遺伝子およびGPR98遺伝子の解析では、熱性けいれんに特異的と考えられる遺伝子変異は同定されなかった。そのため、平成28年度はGPR98遺伝子について引き続きMLPA解析を行い、遺伝子内の微小欠失や重複などの異常を検討することを目的とする。
解析の対象は血縁関係のない日本人熱性けいれん患者24名とする。GPR98遺伝子の塩基配列をデータベースから入手し、プローブ作成ソフトウェアを用いてMLPA用プローブを作成する。次に患者DNAを熱変性させ、プローブを添加して
ハイブリダイゼーションおよびライゲーション反応を行う。その後PCR増幅を行い、ABI Prism 3100 sequencerで電気泳動を行い、目的領域の欠失や重複などの異常の有無を検討する。GPR98遺伝子は非常に大きな遺伝子であるため、解析対象は全エクソンでなく、重要なドメイン部分を中心に行う予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
本年度に行ったMEF2C遺伝子のMLPA解析では、前年度に購入した試薬を使用したため、試薬代が低額となった。また、GPR98遺伝子のMLPA解析については、市販のMLPAキットが存在しないため自分でプローブを設計・作成する必要があったが、使用したソフトウェアでは実験に適したプローブを作成することができなかったため、別のソフトウェアを購入してプローブを作成することとなり、当初の予定よりも時間を要してしまい、平成２８年度に実験を継続することとなった。
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| 次年度使用額の使用計画 |
次年度使用額については、おもにMLPA法によるGPR98遺伝子の変異解析のための試薬等の購入と、研究成果の学会発表のために使用する予定である。
具体的には、MLPAプローブの合成費用、SALSA MLPA試薬 (FALCO biosystems), シークエンス用試薬 (Applied biosystems) などを購入する予定である。また、第13回 国際人類遺伝学会において、本研究の成果の一部を発表する予定である。
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