研究課題
本研究では、体細胞モザイクCINCA患者由来iPS細胞株を用いて、研究期間内に以下の2つの目標を達成する。1) ヒト発生における体細胞モザイクの系統樹を作製し、iPS細胞を用いた体細胞モザイク解析技術の基盤を確立する。2) NLRP3インフラマソームを阻害する化合物の作用機序を明らかにし、NLRP3制御による慢性炎症抑制薬開発のシーズを得る。1)体細胞モザイクの細胞系譜の解析 前年度得られたクラスタリングデータをもとにNLRP3変異細胞と正常細胞に特徴的な遺伝子変異を解析した。結果、いくつかの遺伝子変異によって、それぞれの群がさらにサブクラスタに分けられることが判明した。2) NLRP3インフラマソーム阻害薬の作用機構解明前年度得られた単球細胞株を樹状細胞とマクロファージへ分化させた。樹状細胞に分化させ、さらに成熟させると、樹状突起をもつ典型的な細胞形態が観察された。また、樹状細胞の成熟に伴って、CD11c，CD80，CD86が細胞表面に発現した。一方、マクロファージへと分化させると、M1/M2への分化が可能であった。次に、単球株を用いた高スループットスクリーニング系を構築するために、既存のIL-1b産生経路阻害剤が用量依存的にサイトカイン産生を阻害するか検討した。結果、既存薬が用量依存性にサイトカイン阻害を行う条件を決定した。
2: おおむね順調に進展している
1)モザイク細胞系譜の詳細な解析が進展している。2)スクリーニング系の再構築に成功し、スクリーニングを行える見通しが立ったため。
体細胞モザイクの細胞系譜の解析については、引き続いてiPSCのクローンに認められた変異について、線維芽細胞でdeep sequenceを行い、当該変異が線維芽細胞のうちどの程度の割合に認められるかを評価する。線維芽細胞の一部の細胞とiPSCの一部のクローンに認められる変異の変異の頻度を線維芽細胞と患者血球・毛髪・爪由来のDNA（体細胞由来DNA）との間で比較する。また、個別のiPS細胞クローンに見られる変異について、バリデーションを行う。NLRP3インフラマソーム阻害薬の作用機構解明については、スクリーニング系の構築を継続し、その後新規化合物のスクリーニングを実施し、候補化合物をえる。当該化合物がNLRP3インフラマソームの活性化を阻害するのかを検討する。まず、化合物の作用点を同定するために、NLRP3の下流分子であるASC、Caspase-1及びIL1b分泌のいずれの段階が抑制されているかを確認する。
すべて 2015 2014
すべて 雑誌論文 (9件) (うち査読あり 4件) 学会発表 (6件) (うち招待講演 6件)
Stem Cell Reports
巻: 未定 ページ: 未定
10.1016/j.stemcr.2015.02.010
Stem Cells Transl Med
巻: 4 ページ: 333-338
doi: 10.5966/sctm.2013-0172
Arthritis Rheumatol
巻: 67 ページ: 302-314
10.1002/art.38912
医学のあゆみ
巻: 252 ページ: 899-903
遺伝子医学MOOK
巻: 27 ページ: 66-70
巻: 27 ページ: 120-125
血液内科
巻: 70 ページ: 362-367
PLoS One
巻: 9 ページ: e112291
10.1371/journal.pone.0112291
日本呼吸器学会雑誌
巻: 3 ページ: 625-629
