| 研究課題/領域番号 |
25461602
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| 研究機関 | 京都府立医科大学 |
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研究代表者 |
桑原 康通 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (30590327)
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| 研究分担者 |
細井 創 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (20238744)
家原 知子 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (20285266)
土屋 邦彦 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (90381938)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | 悪性ラブドイド腫瘍 / アポトーシス / SNF5 / NOXA / Mcl-1 |
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| 研究実績の概要 |
【背景】Malignant rhabdoid tumor(以下 MRT)では、ほぼ全例で hSNF5(INI1) の機能喪失が認められている。そのため、MRT の腫瘍原性の解明にはhSNF5の機能解析が重要と考えられている。近年、proapoptotic proteinの1つであるNOXAが、hSNF5 により直接転写活性を受けることが報告された。NOXAは Bcl-2 ファミリーに結合・阻害し、アポトーシスを誘導する。
【目的】hSNF5の機能喪失によるNOXA の発現低下が、MRTにおけるapoptosis 誘導機構に及ぼす影響と薬剤感受性の関係を解析する。
【方法】MRT 細胞株のNOXA の発現を hSNF5 の正常な他の小児固形腫瘍とWester blot法と定量的PCR法で比較した。次に、NOXA安定発現MRT細胞株を樹立し、doxorubicin(DOXR)の感受性とアポトーシス誘導効果をコントロール群と比較した。さらに、MRT細胞株に対してsiRNAによるMcl-1のノックダウンを行い、DOXRの感受性とアポトーシス誘導効果をコントロール群と比較した。MRT細胞株に対するDOXRとBcl-2阻害剤であるTW37の併用効果を検討した。
【結果】MRT細胞株では、他の固形腫瘍の細胞株に比べ NOXAのmRNAとタンパク発現が相関して低下していた。NOXA安定発現群は、DOXRのIC50がコントール群に比べ60%低下し、アポトーシスが誘導された。また、NOXA安定発現群では増殖能が抑制された。Mcl-1ノックダウン群ではDOXRのIC50が90%低下した．この時，アポトーシスが誘導されていることを確認した．DOXRとTW37の併用ではcombination indexが0.9未満となり相乗効果が示された。
【考察と結語】MRT では hSNF5 欠損によってエピジェネティックに NOXA の発現が抑制されている。そのため、MRTではNOXA と Mcl-1 との結合を介したアポトーシスが阻害され、薬剤抵抗性を獲得している。また、NOXAの欠損が腫瘍の増殖能の獲得に関与している可能性も示唆された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
1: 当初の計画以上に進展している
理由
MRT細胞株では、他の固形腫瘍の細胞株に比べ NOXAのmRNAとタンパク発現が相関して低下していた。NOXA安定発現群は、DOXRのIC50がコントール群に比べ60%低下し、アポトーシスが誘導された。また、NOXA安定発現群では増殖能が抑制された。Mcl-1ノックダウン群ではDOXRのIC50が90%低下した．この時，アポトーシスが誘導されていることを確認した．DOXRとTW37の併用ではcombination indexが0.9未満となり相乗効果が示された。このように、細胞株を用いた実験はほぼ終了している。
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| 今後の研究の推進方策 |
MRT細胞株をマウスに移植し、zenograftモデルを作成。マウスの系でMcl-1ノックダウンの効果やTW-37と化学療法剤の併用効果を確認する実験を行う予定である。
また、当院で経験した症例の腫瘍組織でのNOXAの発現やMcl-1の発現を検討し臨床への橋渡し研究へとつなげる予定である。
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