研究課題/領域番号 |
25462267
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研究機関 | 高知大学 |
研究代表者 |
八幡 俊男 高知大学, 教育研究部医療学系, 助教 (40380323)
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研究分担者 |
上羽 哲也 高知大学, 医歯学系, 教授 (00314203)
東 洋一郎 高知大学, 医歯学系, 助教 (80380062)
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研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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キーワード | 悪性脳腫瘍 / エピジェネティクス / ヒストン |
研究概要 |
悪性脳腫瘍細胞においてヒストンH4のゲノムグローバルなアセチル化は、正常神経系細胞と同様に細胞分化と相関性があることを見出している。しかしながら、その制御因子の詳細は未だ不明であり、がん特異的な代謝や遺伝子と関連していると考えている。本課題では、最初に資材を十分に吟味するために、悪性グリオーマ患者から分離した初代培養細胞の分化レベルを体性幹細胞マーカーCD133とグリア前駆細胞マーカーA2B5を用いて検討した。無血清培地で培養したTumor sphereは高頻度にCD133陽性の幹細胞を含んでいた。血清を含む培養液で培養した場合でも継代数の少ないものは幹細胞を比較的多く含み、継代が進むにつれて幹細胞の減少を示した。これらの細胞においてフローサイトメトリーでヒストンH4のゲノムグローバルなアセチル化を解析中である。また、悪性グリオーマの幹細胞を多く含む培養から細胞分化を誘導し、経時的にクロマチン免疫沈降でアセチル化ヒストンが結合する領域のゲノムDNAを保存し、分化により変動するアセチル化ヒストンの結合部位のゲノムDNAライブラリーとした。この中でがん特異的代謝に関連する遺伝子をスクリーニングする予定である。さらに、悪性グリオーマ幹細胞の一部で、分化因子の上流にあることが報告されているCD抗原を見出している。この遺伝子に対するshRNAによる抑制により、幹細胞の増殖能や自己複性能が減少することが分かった。この抗原遺伝子の発現と悪性グリオーマの悪性度の相関性を免疫組織化学染色により検討中である。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
解糖系酵素PKMのスプライシングを可視化するためのベクターは構築したが、ヒストンのアセチル化を可視化するベクターの入手が出来ていない。
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今後の研究の推進方策 |
フローサイトメトリーによりヒストンH4のアセチル化レベルとそれを可視化するベクターによるシグナルの同一性を検討する。解糖系の律速酵素であるPKMのスプライシングを見分けるHaloTag とルシフェラーゼコンストラクトを作製中である。これらのベクターを導入した悪性グリオーマの幹細胞や分化細胞株を樹立する。オートファジーや解糖系の阻害剤を用いてヒストンアセチル化やPKMのスプライシングをReal-timeに観察し、その他のヒストン修飾についても検討を加える。また、放射線や抗がん剤によりDNA障害を受けた場合の解糖系やヒストン修飾に対する影響も検討する。
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次年度の研究費の使用計画 |
国内在庫が無く、入手が出来なかったため。 試薬を購入する予定。
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