子宮内膜症の発症・進展における内膜幹細胞の役割とEMT/METの関係の解明

2015 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 25462574
• 研究機関: 慶應義塾大学
• 研究代表者: 升田 博隆 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (80317198)
• 研究分担者: 丸山 哲夫 慶應義塾大学, 医学部, 准教授 (10209702) ; 内田 浩 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (90286534)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2016-03-31
• キーワード: 子宮内膜症 / 子宮内膜幹細胞 / 上皮間葉転換（EMT） / Side Population W5C5

研究実績の概要

（1）フローサイトメトリーによりSide Population（SP）細胞、W5C5+細胞、CD146+PDGFRβ+細胞の表面抗原解析を行い相互関係の調べることを複数検体で行った。ヒト子宮内膜SP細胞にはCD146+PDGFRβ+細胞がenrichされていることが確認できたが、W5C5の発現についてはSP細胞と非SP細胞を比較し有意差がでなかった。
（2）NOGマウスの腎皮膜下にヒト子宮内膜細胞を移植した系を作成し100%の確率で再構築組織ができ子宮内膜様腺管構造も確認できたが、W5C5の染色については一切陽性細胞が確認されなかった。条件変更を重ねても陽性例がとれないことより、4%PFA固定のパラフィン切片ではW5C5抗体が機能しないと推測し、凍結切片での染色を予定している。
（3）SP細胞がin vivoでもつ浸潤能をin vitroで再現するため、SP細胞とnon-SP細胞を用いてTranswell migration assayを行った。その結果、SP細胞はnon-SP細胞に比べて高い浸潤能を持つことがわかった。同様の系において、SP細胞培養群にEMT阻害剤を投与し、浸潤能の低下を確認しているが、nが少なく有意差に至っていない。
（4）より簡潔に遊走能（浸潤能）を確認するため、SP細胞を2次元培養しwound healing assayを施行した。EMT阻害薬添加群と非添加群の比較により、添加群では遊走能の低下が明らかとなった。この結果は、EMT阻害薬がSP細胞の遊走能（間葉的性質）を押さえる可能性が示唆された。
（5）In vivoにおけるEMT阻害剤の浸潤能抑制効果を見るため、NOGマウスの腎皮膜下にヒト子宮内膜細胞を移植した系を用いて、再構築組織の組織学的評価を行っている。浸潤能を見るため免疫組織化学染色によるヒト由来細胞の動態とEMTマーカーの発現を検討中である。

研究成果

• [雑誌論文] Successful treatment of atypical cesarean scar defect using endoscopic surgery. (2015)
  • 著者名/発表者名: Masuda H, Uchida H, Maruyama T, Sato K, Sato S, Tanaka M
  • 雑誌名: BMC Pregnancy Childbirth 巻: 15巻 ページ: 342
  • DOI: 10.1186/s12884-015-0730-x.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Endometrial side population cells: potential adult stem/progenitor cells in endometrium. (2015)
  • 著者名/発表者名: Masuda H, Maruyama T, Gargett C, Miyazaki K, Matsuzaki Y, Okano H, Tanaka M
  • 雑誌名: Biol Reprod 巻: 93巻 ページ: 1-8
  • DOI: 10.1095/biolreprod.115.131490.
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Stem cells in endometrial physiology. (2015)
  • 著者名/発表者名: Gurung S, Deane JA, Masuda H, Maruyama T, Gargett CE
  • 雑誌名: Semin Reprod 巻: 33巻 ページ: 326-332
  • DOI: 10.1055/s-0035-1558405.
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] CD34 and CD49f double-positive and lineage marker-negative cells isolated from human myometrium exhibit stem cell-like properties involved in pregnancy-induced uterine remodeling. (2015)
  • 著者名/発表者名: Ono M, Kajitani T, Uchida H, Arase T, Oda H, Uchida S, Ota K, Nagashima T, Masuda H, Miyazaki K, Asada H, Hida N, Mabuchi Y, Morikawa S, Ito M, Bulun SE, Okano H, Matsuzaki Y, Yoshimura Y, Maruyama T
  • 雑誌名: Biol Reprod 巻: 93巻 ページ: 1-9
  • DOI: 10.1095/biolreprod.114.127126.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Serum estradiol level during withdrawal bleeding as a predictive factor for intermittent ovarian function in women with primary ovarian insufficiency. (2015)
  • 著者名/発表者名: Miyazaki K, Miki F, Uchida S, Masuda H, Uchida H, Maruyama T
  • 雑誌名: Endocr J 巻: 62巻 ページ: 93-99
  • DOI: 10.1507/endocrj.EJ14-0189.
  • 査読あり
• [雑誌論文] 臍部トロッカー挿入時に胃損傷をきたし，腹腔鏡下にて修復し得た1例． (2015)
  • 著者名/発表者名: 宮崎 薫，佐藤健二，太田邦明，小川誠司，飯野孝太郎，升田博隆，丸山哲夫，末岡 浩，田中 守
  • 雑誌名: 産科と婦人科 巻: 82巻 ページ: 832-835
• [雑誌論文] 付属器摘出後より副角に子宮流血症を発症した1例． (2015)
  • 著者名/発表者名: 世良亜沙子，日原華子，升田博隆，三木史恵、宮崎 薫，太田邦明，内田 浩，丸山哲夫，田中 守，青木大輔
  • 雑誌名: 東京産婦人科学会会誌 巻: 64巻 ページ: 390-393
• [雑誌論文] 【着床】 胚の子宮内膜への侵入． (2015)
  • 著者名/発表者名: 内田 浩，升田博隆，三木史恵，日原華子，吉政佑之，片倉慧美，丸山哲夫，田中 守
  • 雑誌名: HORMONE FRONTIER IN GYNECOLOGY 巻: 22巻 ページ: 49-54
• [学会発表] 脱細胞化骨格のトポロジーが再生子宮の組織極性を決める． (2016)
  • 著者名/発表者名: 三木史恵，丸山哲夫，宮崎 薫，升田博隆，内田 浩，田中 守
  • 学会等名: 第15回日本再生医療学会
  • 発表場所: 大阪国際会議場（大阪府大阪市）
  • 年月日: 2016-03-17 – 2016-03-19
• [学会発表] 子宮内膜と子宮内膜幹細胞そして上皮間葉転換． (2016)
  • 著者名/発表者名: 升田博隆，丸山哲夫，宮崎 薫，松崎有未，岡野栄之，田中 守
  • 学会等名: 第37回エンドメトリオーシス学会 [カレント リサーチ・レビュー]
  • 発表場所: ホテル日航熊本（熊本県熊本市）
  • 年月日: 2016-01-23 – 2016-01-24
  • 招待講演
• [学会発表] 磁性体を用いた非侵略的リアルタイム解析可能な子宮内膜症腹膜病変モデルの開発． (2016)
  • 著者名/発表者名: 升田博隆，丸山哲夫，小田英之，肥田直子，内田 浩，三木史恵，日原華子，吉政佑之，片倉慧美，田中 守
  • 学会等名: 第37回エンドメトリオーシス学会 [日本エンドメトリオーシス学会演題発表賞（基礎部門）]
  • 発表場所: ホテル日航熊本（熊本県熊本市）
  • 年月日: 2016-01-23 – 2016-01-24
• [学会発表] 非典型的な帝王切開瘢痕部症候群に対する治療成功例． (2015)
  • 著者名/発表者名: 升田博隆，佐藤健二，中林 章，佐藤 卓，三木史恵，日原華子，各務真紀，内田 浩，丸山哲夫，吉村泰典，田中 守
  • 学会等名: 第55回日本産科婦人科内視鏡学会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県横浜市）
  • 年月日: 2015-09-10 – 2015-09-12
• [学会発表] 膣中隔合併の完全中隔子宮に対して子宮鏡下手術を行った一例 ― 子宮頸部中隔切断の有用性 ― ． (2015)
  • 著者名/発表者名: 安康真由香，佐藤健二，升田博隆，太田邦明，佐藤 卓，内田 浩，浜谷敏生，丸山哲夫，末岡 浩，田中 守
  • 学会等名: 第55回日本産科婦人科内視鏡学会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県横浜市）
  • 年月日: 2015-09-10 – 2015-09-12
• [学会発表] Non-invasive and real-time assessment of peritoneal lesions generated from human endometrial cell transplants locally accumulated by magnetic force in immunodeficient mice. (2015)
  • 著者名/発表者名: Tetsuo Maruyama, Hirotaka Masuda, Naoko Hida, Hideyuki Oda, Kaoru Miyazaki, Miki Fumie, Hanako Hihara, Kuniaki Ota, Hiroshi Uchida, Mamoru Tanaka
  • 学会等名: 31th Annual Meeting of the European Society of Human Reproduction and Embryology (ESHRE).
  • 発表場所: Lisbon, Portugal.
  • 年月日: 2015-06-14 – 2015-06-17
  • 国際学会
• [学会発表] Significance of endometrial stem/ progenitor cells in women with endometriosis. (2015)
  • 著者名/発表者名: Hirotaka Masuda, Tetsuo Maruyama, Mamoru Tanaka, Caroline Gargett
  • 学会等名: International Federation of Fertility Societies / Japan Society for Reproductive Medicine (IFFS / JSRM) International Meeting 2015. [IFFS Award]
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県横浜市）
  • 年月日: 2015-04-26 – 2015-04-29
  • 国際学会
• [学会発表] Decellularized uterine matrix can promote uterine regeneration in vivo without immune rejection upon allotransplantation. (2015)
  • 著者名/発表者名: Kaoru Miyazaki, Yuki Ueno, Hirotaka Masuda, Hiroshi Uchida, Tetsuo Maruyama
  • 学会等名: International Federation of Fertility Societies / Japan Society for Reproductive Medicine (IFFS / JSRM) International Meeting 2015
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県横浜市）
  • 年月日: 2015-04-26 – 2015-04-29
  • 国際学会
• [学会発表] 単一抗体によるヒト子宮内膜間葉系幹細胞の新規分離法の開発． (2015)
  • 著者名/発表者名: 升田博隆，丸山哲夫，田中 守
  • 学会等名: 第88回日本内分泌学会
  • 発表場所: ホテルニューオータニ（東京都千代田区）
  • 年月日: 2015-04-23 – 2015-04-25
• [学会発表] 同種異系移植におけるラット子宮脱細胞化マトリックスの免疫原性と再生組織の内分泌学的検討． (2015)
  • 著者名/発表者名: 上野友輝，宮崎 薫，升田博隆，内田 浩，丸山哲夫
  • 学会等名: 第88回日本内分泌学会
  • 発表場所: ホテルニューオータニ（東京都千代田区）
  • 年月日: 2015-04-23 – 2015-04-25
• [学会発表] Endometrial stem/ progenitor cells in women with endometriosis. (2015)
  • 著者名/発表者名: Hirotaka Masuda, Tetsuo Maruyama, Mamoru Tanaka, Daisuke Aoki, Caroline Gargett
  • 学会等名: 第67回日本産科婦人科学会 International Session [Good Poster Award]
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県横浜市）
  • 年月日: 2015-04-09 – 2015-04-12
• [備考] 慶應義塾大学医学部 産婦人科学教室ホームページ内 生殖内分泌研究室
  • URL: http://www.obgy.med.keio.ac.jp/04research/03rep-endo.html