| 研究課題/領域番号 |
25462696
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| 研究機関 | 久留米大学 |
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研究代表者 |
千年 俊一 久留米大学, 医学部, 准教授 (20299514)
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| 研究分担者 |
深堀 光緒子 久留米大学, 医学部, 助教 (50529310)
佐藤 公則 久留米大学, 医学部, 教授 (70196228)
梅野 博仁 久留米大学, 医学部, 教授 (40203583)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | 声帯再生 / 再生医療 / 声帯瘢痕 / 上皮シート / 移植 |
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| 研究実績の概要 |
H26年度に、頬粘膜の組織培養から作製した培養重層組織の上皮の厚さは約40μmであり、正常イヌ声帯上皮（約25～50μm）に近い厚みであった。また免疫組織化学において、作製した組織の重層上皮は、上皮性マーカーであるサイトケラチンが全層に陽性で、基底細胞はβ1インテグリンが陽性であった。基底細胞は立方型の胞体であり、表層になるにつれて扁平となる3～5層に重層化した重層扁平上皮であることを確認した。さらに、上皮下組織内の細胞はビメンチン陽性であった。走査型電子顕微鏡検査において、重層上皮表面に正常粘膜上皮同様の微絨毛の存在を確認した。作製した重層培養組織は、組織学的に正常声帯との類似していた。
次に声帯モデルとして声帯に対する自家移植の実験を開始した。移植用の培養重層組織の作成を行い、声帯傷害モデルへの移植実験を行った。その際に、口腔粘膜を取り出したイヌから自己血清を採取し、これを他種血清の代替として用いることで生体内での安全性に配慮することにした。さらに、移植における生着性と細胞配向性を考慮して、配向性をもつメッシュコラーゲンシートを線維芽細胞コラーゲンゲル層の足場に利用し、より確実な移植実験を行った。
移植においては喉頭載開した上で、片側声帯の膜様部全長にわたり筋表層まで切除した後に、培養組織を切除面へフィブリン糊で接着、さらに吸収糸で縫合固定した。移植後8週目に喉頭を摘出し、摘出喉頭用いて吹鳴実験を行った。ストロボスコピーにより声帯振動を観察したところ、上皮のみのを移植した声帯では、規則的な声帯振動がみられたものの、粘膜波動は正常側に比べ、小さい結果であった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
研究に要した時間が計画を遂行するのに妥当であった。
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| 今後の研究の推進方策 |
H27年度の実験計画通り、摘出喉頭の前額断の組織学的検討を行う。摘出喉頭を10％ホルマリンに固定し、脱水、パラフィン包埋した後に、HE染色、EVG染色、銀染色、PAS染色、Alcian blue染色を行なう。光学顕微鏡を用いて、再生声帯粘膜上皮および粘膜上皮下の層構造を観察し、健常側の声帯と層構造を比較する。また、酵素抗体法による免疫染色としてはH25年度と同様の手法で、再生粘膜の構成蛋白質を観察する。そして、走査型、透過型電子顕微鏡によりH25年度と同様の手法で、移植粘膜組織表面の非上皮細胞の存在を除外し3次元的組織構造を観察する。そのなかで移植培養粘膜組織の微細構造を観察する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
年度末に試薬が不足したため購入が必要であった。
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| 次年度使用額の使用計画 |
動物実験時の麻酔時に麻酔薬として使用した。
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