| 研究課題/領域番号 |
25462752
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| 研究機関 | 東京医科歯科大学 |
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研究代表者 |
高瀬 博 東京医科歯科大学, 医歯(薬)学総合研究科, 講師 (20451940)
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| 研究分担者 |
望月 學 東京医科歯科大学, 医学部附属病院, 非常勤講師 (10010464)
清水 則夫 東京医科歯科大学, 再生医療研究センター, 准教授 (30226245)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | 急性網膜壊死 / ヘルペス性虹彩炎 / 水痘帯状疱疹ウイルス / PCR |
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| 研究実績の概要 |
前年度に引き続き、水痘帯状疱疹ウイルス (VZV) によるVZV虹彩炎および急性網膜壊死患者眼内液の収集と、遺伝子の抽出を継続し、さらに遺伝子配列の解析作業を開始した。
まず、VZV虹彩炎および急性網膜壊死患者の眼内液検体に対して、診断目的でMultiplex PCR法およびReal-time PCR法を用いた各種病原微生物の遺伝子検査を行った。このうち水痘帯状疱疹ウイルス遺伝子が陽性に検出された眼内液検体を用いて、そこに含まれる水痘帯状疱疹ウイルス遺伝子におけるオープンリーティングフレーム (ORF)領域をPCRにより増幅した。増幅したORF領域は、ORF21, ORF22, ORF50 であり、これらに対する特異的プライマーを用いてNested-PCRを施行した。増幅されたPCR産物は、遺伝子精製キットを用いて精製し凍結保存した。
次に、これらの検体を用いてORF21, ORF22, ORF50における一塩基多型解析を開始した。すなわち、これら３つのORFの遺伝子配列を遺伝子解析装置を用いて明らかにし、これに基づきVZV虹彩炎と急性網膜壊死それぞれの眼内から得られた水痘帯状疱疹ウイルスの遺伝子型を、既知の系統株 (Clade 1-5, VI, VII) への分類を行っている。
今後、全ての検体について系統株の分類を完了し、さらに疾患の発症、感受性に関連すると思われる遺伝子領域に関する変異の有無についての検索を行う予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
患者眼より採取する眼内液、特に前房水から得られる遺伝子量は少なく、遺伝子増幅および遺伝子配列解析が困難な検体が多く存在する。そのため、PCRおよび遺伝子解析実験の施行条件の検討に時間を要している。
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| 今後の研究の推進方策 |
全ての検体について系統株の分類を完了し、さらに疾患の発症、感受性に関連すると思われる遺伝子領域に関する変異の有無についての検索を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
患者眼より採取する眼内液、特に前房水から得られる遺伝子量は少なく、遺伝子増幅および遺伝子配列解析が困難な検体が多く存在する。そのため、PCRおよび遺伝子解析実験の施行条件の検討に時間を要したため、予定している多数の検体解析に至らず、これらに必要な使用額を次年度へ持ち越しとした。
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| 次年度使用額の使用計画 |
収集した検体からの遺伝子増幅、精製を継続するため、PCR試薬、遺伝子抽出・精製きっとの購入に使用する予定である。遺伝子解析には次世代遺伝子解析装置の使用を検討し、この施設使用費用に用いる予定である。
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