| 研究概要 |
ＰＫＲ変異ＲＡＷ細胞を用いて，細胞膜融合分子の発現と破骨細胞形成機構を明らかにし，初代培養細胞を用いて破骨細胞の分化と骨吸収能に対するＰＫＲの影響を調べた。ＰＫＲ変異細胞をRANKLで刺激すると，TRAP 陽性単核細胞は多数出現するが，多核細胞はほとんど認められなかった。この結果は，PKR が破骨細胞膜融合関連分子の発現制御に関わり，破骨前駆細胞同士の融合段階に影響し，破骨細胞形成を阻害している可能性を示唆する。野生型およびPKR変異細胞をRANKLで刺激して，破骨細胞膜融合関連分子 (MFR, CD9, CD44,DC-STAMP, ADAM8, Atp6v0d2, E-cadherin) の発現をReal-time PCR とウエスタンブロット法を用いて解析した。また，マウス骨髄からマクロファージを採取し，この細胞をPKR 活性阻害剤2-aminopurine (2-AP) で前処理を行った後，それぞれの細胞をRANKL で刺激し，破骨細胞膜融合関連分子と成熟破骨細胞マーカー（カテプシンK，カルシトニン受容体，TRAP）の発現を調べた。
炎症性骨破壊モデルである歯周病モデルマウスを作成し，ＰＫＲ活性化阻害剤である2-APの治療効果と予防効果について，骨形態計測による詳細な解析を行った。また，ＰＫＲに対するsiRNAを関節炎マウスの炎症による骨破壊部位に導入し，炎症性骨破壊部位におけるＰＫＲの役割について解析をした。さらに、病変部位のＰＫＲの遺伝子および蛋白質発現をin situハイブリダイゼーション法，免疫組織化学染色法，ウエスタンブロッティング法にて解析した。病的骨吸収状態に加えて，正常な骨破壊部位（新生仔マウス下顎骨歯牙萌出部位）でのＰＫＲの発現を比較検討し，形態学的に解析した。
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