CCNファミリ－３の新機能：内軟骨性骨形成における役割

2015 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 25462888
• 研究機関: 岡山大学
• 研究代表者: 服部 高子 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 助教 (00228488)
• 研究分担者: 青山 絵理子 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 助教 (10432650) ; 滝川 正春 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (20112063) ; 西田 崇 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 准教授 (30322233) ; 久保田 聡 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (90221936)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2016-03-31
• キーワード: NOV/CCN3 / トランスジェニックマウス / 内軟骨性骨形成 / SFRP5 / in situ hybridization / 間葉系細胞 / 高密度培養系 / 軟骨分化

研究実績の概要

軟骨組織特異的CCN3過剰発現ベクター(Col2a1-mNOV-GFP-IRES-LacZ)をマウス受精卵に注入することによって得られたトランスジェニックマウス(CCN3col2a1tg)より軟骨細胞を単離し、行ったマイクロアレイ解析によって発現が高度に誘導、または高度に抑制されている遺伝子の発現レベルをreal time-PCRにより再確認したところ、WNTシグナルの抑制因子として報告されているSFRP(secreted frizzled-related protein)5が高度に誘導されていることが明らかになった。そこで、前年度までに確認された軟骨組織特異的NOVの過剰発現効果がSFRP5の誘導を介しているか確認するために以下の実験を行った。
① in situ hybridizationによりCCN3col2a1tgの軟骨組織においてSFRP5が誘導されていることを確認した。
② SFRP5リコンビナント蛋白を作製し、野生型マウス肢芽由来間葉系細胞の高密度培養系において添加したところ、CCN3col2a1tg由来の間葉系細胞の高密度培養系において観察された軟骨分化の促進が再現された。
③ SFRP5ノックアウトマウスとCCN3col2a1tgを交配し、CCN3col2a1tg,SFRP5-/-マウスを作製した。現在表現型の変化を組織学的に観察している。

研究成果

• [雑誌論文] Generation and analyzing cartilage specific CCN2 overexpressing transgenic mice (2016)
  • 著者名/発表者名: Takako Hattori, Shinsuke Itoh and Masaharu Takigawa
  • 雑誌名: Methods in Molecular Biology 巻: in press ページ: in press
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Protein Imaging of CCN2 and CCN3 in a live cell (2016)
  • 著者名/発表者名: Takako Hattori, Mitsuhiko Hoshijima, and Masaharu Takigawa
  • 雑誌名: Methods in Molecular Biology 巻: in press ページ: in press
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Protocols for screening binding partners to CCN proteins: Yeast two hybrid system (2016)
  • 著者名/発表者名: M. Hoshijima, T. Hattori, M. Takigawa
  • 雑誌名: Methods in Molecular Biology 巻: in press ページ: in press
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Production of recombinant CCN family 2 protein in Escherichia coli. (2016)
  • 著者名/発表者名: Eriko Aoyama, Takako Hattori, Satoshi Kubota, Masaharu Takigawa
  • 雑誌名: Methods in Molecular Biology 巻: in press ページ: in press
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Sorcin Expression in the Epiphyseal Growth Plates of Mice (2016)
  • 著者名/発表者名: Mariko Kawai, Ning Liu, Takako Hattori, Yo-Hei Kataoka, Masaharu Takigawa, Satoshi Kubota, Toshio Yamamoto and Kiyoshi Ohura
  • 雑誌名: Journal of Hard Tissue Biology 巻: 25(1) ページ: 57-62
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Role of CCN2 in Amino Acid Metabolism of Chondrocytes. (2016)
  • 著者名/発表者名: Murase Y, Hattori T, Aoyama E, Nishida T, Maeda-Uematsu A, Kawaki H, Lyons KM, Sasaki A, Takigawa M, Kubota S.
  • 雑誌名: J Cell Biochem. 巻: 117(4) ページ: 927-37
  • DOI: 10.1002/jcb.25377
  • 査読あり / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Involvement of multiple CCN family members in platelets that support regeneration of joint tissues (2016)
  • 著者名/発表者名: Hara C, Kubota S, Nishida T, Hiasa M, Hattori T, Aoyama E, Moriyama Y, Kamioka H, Takigawa M.
  • 雑誌名: Mod Rheumatol. 巻: in press ページ: in press
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Dual pathways to Endochondral osteoblasts: A novel chondrocyte-derived cell identified in hypertrophic cartilage. (2015)
  • 著者名/発表者名: Park, J., Gebhardt, M., Golovchenko, S., Perez Branguli, F., Hattori, T., Hartmann, C., Zhou, X., de Crombrugghe, B., Stock, M., Schneider, H., von der Mark, K.
  • 雑誌名: Biol Open. 巻: 4(5) ページ: 608-21
  • DOI: 10.1242/bio.201411031
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [学会発表] 軟骨細胞形成を支える長鎖非コードRNA (2016)
  • 著者名/発表者名: 石川崇典、久保田聡、村瀬有里香、西田 崇、服部高子、滝川正春
  • 学会等名: 第29回日本軟骨代謝学会
  • 発表場所: 広島
  • 年月日: 2016-02-19 – 2016-02-20
• [学会発表] 血小板に含まれるCCファミリータンパク質の解析と軟骨再生への応用 (2016)
  • 著者名/発表者名: 原 規子、久保田聡 、青山絵理子、青山絵理子、服部高子、滝川正春
  • 学会等名: 第29回日本軟骨代謝学会
  • 発表場所: 広島
  • 年月日: 2016-02-19 – 2016-02-20
• [学会発表] 成熟破骨細胞のアクチンリング形成におけるCD302の機能とCCN2による制御 (2015)
  • 著者名/発表者名: 青山絵理子、星島光博、服部高子、久保田聡、滝川正春
  • 学会等名: 第38回分子生物学会年会・第88回生化学会大会合同大会BMB2015
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2015-12-01 – 2015-12-04
• [学会発表] 骨細胞の作用を介した破骨細胞形成におけるCCN2の役割 (2015)
  • 著者名/発表者名: 西田 崇、久保田聡、服部高子、Lynda F Bonewald, 滝川正春
  • 学会等名: 第38回分子生物学会年会・第88回生化学会大会合同大会BMB2015
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2015-12-01 – 2015-12-04
• [学会発表] Metabolic impacts of CCN2 in chondrocytes. (2015)
  • 著者名/発表者名: Kubota, S., Murase, Y., Maeda-Uematsu, A., Hattori, T., Aoyama, E., Nishida, T., Kawaki, H., Lyons, K. M., Takigawa, M.
  • 学会等名: Eight International Workishop on the CCN Family of Genes
  • 発表場所: Nice, France
  • 年月日: 2015-11-03 – 2015-11-08
  • 国際学会
• [学会発表] Role of interaction between CCN2 and Rab14 in vesicle trafficking in chondrocytes novel intracellular function of CCN2. (2015)
  • 著者名/発表者名: Hoshijima, M., Hattori, T., Aoyama, E., Nishida, T., Kubota, S., Kamioka, H., Takigawa, M.
  • 学会等名: Eight International Workishop on the CCN Family of Genes
  • 発表場所: Nice, France
  • 年月日: 2015-11-03 – 2015-11-08
  • 国際学会
• [学会発表] Regenerative effects of CCN2 ondependent modules and CCN3 on articular chondrocytes/cartilage (2015)
  • 著者名/発表者名: Takigawa, M., Abd El Kader, T., Janune, D., Aoyama, E., Nishida, T., Hattori, T., Hara, E. S., One, M., Tabata, Y., Kuboki, T., Kubota, S.
  • 学会等名: Eight International Workishop on the CCN Family of Genes
  • 発表場所: Nice, France
  • 年月日: 2015-11-03 – 2015-11-08
  • 国際学会
• [学会発表] 破骨細胞分化における新規アクチン骨格制御因子としてのDCL-1/CD302の役割とCCN2との関連 (2015)
  • 著者名/発表者名: 青山絵理子、星島光博、服部高子、久保田聡、滝川正春
  • 学会等名: 第57回歯科基礎医学会
  • 発表場所: 新潟
  • 年月日: 2015-09-11 – 2015-09-13
• [学会発表] CCN2は骨細胞を介して破骨細胞形成を制御する (2015)
  • 著者名/発表者名: 西田 崇、久保田聡、服部高子、滝川正春
  • 学会等名: 第57回歯科基礎医学会
  • 発表場所: 新潟
  • 年月日: 2015-09-11 – 2015-09-13
• [学会発表] CCN2とRab14の相互作用が軟骨細胞の小胞輸送に及ぼす役割 ～軟骨分化促進因子CCN2の新たな細胞内機能～ (2015)
  • 著者名/発表者名: 星島光博、服部高子、青山絵理子、西田 崇、久保田聡、上岡 寛、滝川正春
  • 学会等名: 第57回歯科基礎医学会
  • 発表場所: 新潟
  • 年月日: 2015-09-11 – 2015-09-13
• [学会発表] Introducing CCN2 independent modules as a regenerative therapy for osteoarthritis and futher selecting the most suitable among them. (2015)
  • 著者名/発表者名: Abd El-Kader, T., Nishida, T., Hattori, T., Aoyama, E., Janune, D., Hara, E. S., Ono M., Tabata, Y., Kuboki, T., Kubota, S., Takigawa, M
  • 学会等名: 第7回日本CCNファミリー研究会若手国際学術奨励賞
  • 発表場所: 岡山
  • 年月日: 2015-08-29
  • 招待講演
• [学会発表] CCN2の新たな細胞内機能：CCN2 とRab14の相互作用が軟骨細胞の小胞輸送に及ぼす役割 (2015)
  • 著者名/発表者名: 星島光博、服部高子、青山絵理子、西田 崇、久保田聡、上岡 寛、滝川正春
  • 学会等名: 第7回日本CCNファミリー研究会
  • 発表場所: 岡山
  • 年月日: 2015-08-29
• [学会発表] CCN2による軟骨細胞アミノ酸代謝制御機構の解明 (2015)
  • 著者名/発表者名: 村瀬有里香、服部高子、青山絵理子、西田 崇、前田 彩、川木晴美、Lyons, K. M., 佐々木朗、滝川正春、久保田聡
  • 学会等名: 第7回日本CCNファミリー研究会
  • 発表場所: 岡山
  • 年月日: 2015-08-29
• [学会発表] CCN2は骨細胞に作用し、破骨細胞を正に制御する (2015)
  • 著者名/発表者名: 西田 崇、久保田聡、服部高子、Bonewald, L. F., 滝川正春
  • 学会等名: 第7回日本CCNファミリー研究会
  • 発表場所: 岡山
  • 年月日: 2015-08-29
• [学会発表] 軟骨特異的CCN3過剰発現は内軟骨性骨化の遅延と関節変性を誘発する (2015)
  • 著者名/発表者名: 服部高子、角谷宏一、桑原実穂、大野充昭、星島光博、窪木拓男、久保田聡、滝川正春
  • 学会等名: 第33回日本骨代謝学会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2015-07-23 – 2015-07-25
• [学会発表] 新たな破骨細胞制御因子DCL-1/CD302の作用機構の解明とCCN2との関連 (2015)
  • 著者名/発表者名: 青山絵理子、服部高子、星島光博、久保田聡、滝川正春
  • 学会等名: 第33回日本骨代謝学会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2015-07-23 – 2015-07-25
• [学会発表] CCN2による軟骨細胞のアミノ酸代謝制御 (2015)
  • 著者名/発表者名: 村瀬有里香、服部高子、青山絵理子、西田 崇、前田 彩、川木晴美、佐々木朗、滝川正春、久保田聡
  • 学会等名: 第33回日本骨代謝学会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2015-07-23 – 2015-07-25
• [学会発表] 破骨細胞の成熟を制御する新規膜タンパク質CD302/DCL-1の機能とCCN2との結合 (2015)
  • 著者名/発表者名: 青山絵理子、服部高子、星島光博、久保田聡、滝川正春
  • 学会等名: 第6回骨バイオサイエンス研究会
  • 発表場所: 岡山
  • 年月日: 2015-07-04
• [学会発表] 軟骨細胞アミノ酸代謝とCCN2 (2015)
  • 著者名/発表者名: 村瀬有里香、服部高子、青山絵理子、西田 崇、前田 彩、川木晴美、Karen M Lyons、佐々木朗、滝川正春、久保田聡
  • 学会等名: 第6回骨バイオサイエンス研究会
  • 発表場所: 岡山
  • 年月日: 2015-07-04
• [学会発表] 成熟破骨細胞の形成におけるCD302/DCL-1の新機能とCCN2との関連 (2015)
  • 著者名/発表者名: 青山絵理子、星島光博、服部高子、久保田聡、滝川正春
  • 学会等名: 第1回日本骨免疫学会
  • 発表場所: 沖縄
  • 年月日: 2015-06-30 – 2015-07-02