| 研究課題/領域番号 |
25462912
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
北村 哲也 北海道大学, 歯学研究科(研究院), 助教 (00451451)
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| 研究分担者 |
進藤 正信 北海道大学, 歯学研究科(研究院), 教授 (20162802)
東野 史裕 北海道大学, 歯学研究科(研究院), 准教授 (50301891)
松田 彩 北海道大学, 歯学研究科(研究院), 学術研究員 (60514312)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | 抗癌剤 / PTP4A1 / シスプラチン |
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| 研究概要 |
我々は、シングルセルクローニング法を応用した独自の方法で、これまでにシスプラチン耐性遺伝子を同定してきた。多くの抗癌剤耐性遺伝子の研究で用いられる方法は、耐性株を抗癌剤によって選択的に樹立し、親株との遺伝子発現をマイクロアレイによって検索する方法である。これは主に薬剤によって誘導される外因性耐性遺伝子の検索の方法に適しているとかんがえられる。我々の方法はこれとは異なり内因性のシスプラチン耐性遺伝子に注目したものである。
我々はこれまでに内因性耐性遺伝子の一つとしてPTP4A1遺伝子に注目してきた。これまでにPTP4A1を遺伝子導入した細胞はシスプラチンに耐性に働くことを示してきたが、さらに細胞の増殖能が亢進することも明らかとなり、PTP4A1高発現腫瘍が多角的に悪性化に関与していることが示唆された。
またPTP4A1発現とシスプラチン抵抗性の関連性を調べるため、実際の患者サンプルを用いて実験を行った。対象とした腫瘍サンプルを、シスプラチンが奏功し再発を認めなかった群（CR群）、シスプラチンが奏功しなかったまたは再発を認めた群（non CR群）の2群に分け、生検時の組織を用いて免疫染色を行った。non CR群ではCR群に比べやや強く染色される傾向がみられたものの、その染色性は弱く判定は非常に困難であった。そのため生検組織からmRNAを採取しPTP4A1の発現量について比較した。non CR群ではCR群に比べ、PTP4A1 mRNAの発現が有意に発現量が高かった。これらのことからPTP4A1はシスプラチン抵抗性と関連性があるだけでなく、臨床応用できる可能性を示唆していた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
PTP4A1が in vitroだけでなくin vivoにおいてもシスプラチンと関連性があると考えられることを前述した。これはPTP4A1の研究を進める上でとても重要な結果であり、この研究を継続する価値があると考えられた。と同時に、我々が行った内因性耐性遺伝子の検索方法が有用であると考えられ、他の候補も内因性耐性遺伝子である可能性を秘めていると考えられた。
しかしながら、PTP4A1のシスプラチン耐性機序は、細胞活性に働くAKTが関与していることはわかっているものの、それ以上の機構は明らかにはなっておらず、これを解明することは必要である。
それらを総合して(2) おおむね順調に進展していると自己評価を行った。
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| 今後の研究の推進方策 |
PTP4A1のmRNA量とシスプラチン耐性に関連性はみられたものの、病理組織学的研究によるPTP4A1の免疫染色の結果は必ずしも良好ではなかった。染色性が不十分であったことから、他の種類の抗体を用いて検索する必要があると考えられた。また他の原因としてPTP4A1タンパク量とmRNA量が比例していない可能性も考えられた。
本研究は口腔がん細胞であるHSC-3細胞を用いて候補となる遺伝子群を検索した。ほかの口腔がん細胞も用いて同様の実験を行い、共通する遺伝子があれば耐性遺伝子である可能性が更に高くなると考えられる。それらをターゲットにした抗体を用いて、がんの生検検体を免疫染色して抗癌剤奏功の可否が明らかにすることが最終目標である。前述のようにmRNAとタンパク質の量が比例しない可能性があることを鑑みると、近年普及してきたタンパクアレイを用いて同様の実験を行うと、更に臨床応用に結びつく可能性が高いと考えられた。またいくつかの耐性遺伝子を組み合わせることで更に信頼度の高い予測が可能になると考えられ、その検索を進めると共に耐性機序についても研究に邁進する予定である。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
当初の研究計画と若干異なったことが原因として考えられる。
当該年度の所要額のうち95%以上は実支出額の累計額として使用しているため、次年度使用額の増分は計画の変更に影響を与えるものではないと考える。
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