研究課題
我々は、口腔癌の生検時に、その癌のシスプラチン耐性あるいは感受性の程度を予測するために、シスプラチン耐性遺伝子の同定を行ってきた。同様の研究はこれまで長く行われてきたが、我々が行っている方法とは大きく異なる。抗癌剤耐性遺伝子には2種類あることが知られている。ひとつは獲得性（外因性）耐性遺伝子で、抗癌剤によって誘導される遺伝子群のうち抗癌剤耐性に働くものを示す。それに対して内因性耐性遺伝子は、抗癌剤によって誘導されるものではなく、癌が本来持っている抗癌剤耐性遺伝子である。これまでのほとんどの研究は耐性細胞を低濃度抗癌剤処理に寄って樹立し、親株との遺伝子発現パターンを比較検討することで耐性遺伝子を同定してきた。しかしこの方法は、獲得性耐性遺伝子をターゲットにした研究である。実際の癌患者が来て、生検を行い免疫染色でその癌の耐性有無を予測する場合には、内因性耐性遺伝子の同定が必要となる。そこで、我々はシングルセルクローニング法を用いて口腔癌細胞株から数種の細胞株を樹立し、それぞれの細胞株の遺伝子発現パターンを比較検討することで、数種の耐性遺伝子を見出してきた。しかし、これら遺伝子群は一種類の細胞株から見つかったもので、口腔癌に普遍的な耐性遺伝子を同定するためには、数種類の口腔癌細胞株を用いて同様の実験を行い、共通する遺伝子群を検索する必要がある。そこで、我々はHSC-3細胞の他にSAS細胞、HSC-4細胞を用いてシングルセルクローニングを行って数種類の細胞株をそれぞれ樹立した。それらのシスプラチン抵抗性をMTS assayを用いけ調べ、シスプラチン耐性細胞および感受性細胞を樹立した。
2: おおむね順調に進展している
口腔癌細胞株HSC-3細胞を用いてシングルセルクローニングを行い、数種の耐性遺伝子を同定した。それらは実際にシスプラチン抵抗性と相関関係があった。しかし、臨床検体を用いて免疫染色を行ったところ、それら遺伝子を発現している扁平上皮癌ではシスプラチン抵抗性を示す傾向がみられたものの、その差は十分とは言えなかった。さらに有用な耐性遺伝子を同定するためには、数種の細胞株を用いて同様の実験を行い、それらに共通する遺伝子群を同定する必要がある。そこで、口腔癌細胞株であるSAS細胞およびHSC-4細胞からシングルセルクローニングを行った。数種の明らかにシスプラチン感受性の異なる細胞株を樹立できたことから、研究は概ね順調に進展していると考えられた。
以前にHSC-3細胞を用いてRNAマイクロアレイを行って、内因性耐性遺伝子を同定したが、免疫染色の結果は十分でなかったことを先に述べた。そこで今回樹立した細胞株はタンパクアレイによって解析を行う予定である。
当初の実験計画と若干異なったことが原因として考えられる。
数種類の細胞のタンパクアレイを行うために、本年度は当初の予定より多額になると考えられる。
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