| 研究概要 |
アリゾナ州立大学のYixin Shi博士が研究協力者として本研究に参加している。Shi博士のもとで行ったStable Isotope Labeling by/with Amino acids in Cell culture (SILAC) 法による解析でPorXによってup-regulateされるタンパク質として以下のものが検出された。Tlr, RagA, 0704, TonB, 1519, 1112, Sod, htrA, DnaK, RpoC, 0354, RpsG, ThrS, GlyQS,InfC, RpsB, alas, RplT, Kgp, PorQ, PorU, PorV, Pnp, 0130, Rnr。また、down-regulateされるタンパク質として以下のものが検出された。Mfa1, 0295, 1953, 0741, 0890, HagB, 0659, 0950, 1004, 1005, GrpE, Lon, Rho, AsnS, LysS, RplQ, ValS, IleS, RplL, RgpA, 0872, 1631。マイクロアレイ解析での結果と一部重なる部分があるが、新たに発現の調節がみられたタンパク質が多数存在した。そのなかでRagAタンパク質について解析を進めた結果、以下のことがわかった。
１．ゲルシフトアッセイにより、組換えPorXタンパク質はragA遺伝子のプロモーター領域に結合することがわかった。
２．ragA遺伝子転写産物をプライマーイクステンションで解析し、転写開始点が２か所あることがわかった。野生株およびporX株からmRNAを調製し、解析したところ、どちらの開始点からの転写産物もporX株で減少していることがわかった。
３．フィンガープリント法で組換えPorXタンパク質が結合する領域を解析したところ、特徴のある配列に結合していることがわかった。
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