| 研究課題/領域番号 |
25462945
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| 研究機関 | 東北大学 |
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研究代表者 |
八巻 惠子 東北大学, 歯学研究科(研究院), 助教 (90182419)
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| 研究分担者 |
佐藤 拓一 東北大学, 歯学研究科(研究院), 講師 (10303132)
真柳 弦 東北大学, 歯学研究科(研究院), 助教 (10451600)
島内 英俊 東北大学, 歯学研究科(研究院), 教授 (70187425)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | 歯内治療学 / 根管内細菌叢 / 16S ribosomal RNA / メタゲノム解析 / PCR |
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| 研究実績の概要 |
根尖性歯周炎の原因が根管内の細菌感染であることは、確立した知見である。しかし、感染根管から検出される細菌は多種多様で重複感染を呈していることが多く、歯周病におけるRed groupに相当するような「根尖歯周組織に対する病原性が特に強い菌」というものはまだ特定されていない。菌種、すなわちフローラ（細菌叢）中の優勢菌の種類や共存共生する菌種の組み合わせばかりではなく、棲息する細菌の総量や、細菌の集合体であるフローラそのものが病原性を発揮している可能性もある。本研究の目的は、メタゲノム解析を通じ感染根管をパンゲノムとして捉え、その構造や機能特性を解明し、新しい歯内治療ストラテジーに応用することである。
根尖性歯周炎に罹患し東北大学病院歯内療法科を受診した患者からインフォームドコンセントを得た上で、感染根管から象牙質試料を採取しメタゲノム解析した。各症例における試料採取は３回、すなわち①根管治療前、②根管の機械的・化学的拡大形成後、③根管貼薬による消毒が奏功し根管充填を施行する直前、に実施した。それぞれの治療ステージにおいて、根管壁を削去した手用ファイルの刃部を滅菌ニッパーで切断し滅菌チューブに投入、生理食塩水を加え試料とした。試料中の象牙質削片を分散均一化後、メタゲノム専用のDNA抽出を行い、さらに16S rRNA遺伝子を標的としたメタゲノム専用のプライマーを用いてPCR増幅を行った。続いて454 Genome Sequencer FLX system (Roche)によってpyrosequencingを行い、得られたシークエンス・データをBlast search解析し、従来の定量・定性分析、すなわち迅速細菌数測定や嫌気培養法とPCR法を組み合わせた手法により得られた知見と比較し、多角的に検討中である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本年度の研究により、高速シークエンサーを用いたメタゲノム解析を通じて、感染根管内フローラの細菌構成の精密な解析、ならびに治療経過に伴うフローラの変遷をモニターできる可能性が明らかになった。
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| 今後の研究の推進方策 |
次年度は臨床症例を増やしてBLAST search解析を進め、フローラ構成と臨床症状、治療の進展に伴うフローラ構成の変遷に着目し、根尖性歯周炎を惹起する病原因子の実体を追究していく予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
年度末の国際学会に参加したため、為替レートに左右される旅費および参加費の正確な金額を正確に想定できず、余剰金が生じた。
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| 次年度使用額の使用計画 |
実験器具などの消耗品購入費用に充当する。
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