| 研究課題/領域番号 |
25463223
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| 研究機関 | 北海道医療大学 |
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研究代表者 |
西村 学子 北海道医療大学, 歯学部, 講師 (10337040)
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| 研究分担者 |
太田 亨 北海道医療大学, 公私立大学の部局等, 教授 (10223835)
荒川 俊哉 北海道医療大学, 歯学部, 講師 (40306254)
古市 保志 北海道医療大学, 歯学部, 教授 (80305143)
安彦 善裕 北海道医療大学, 歯学部, 教授 (90260819)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | エピジェネティクス / 歯周病 / 歯肉上皮 / 歯周病原菌 |
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| 研究概要 |
エピジェネティクスは、後天的には主に環境因子により遺伝子の表現系が変化する現象である。う蝕病原菌や歯周病原菌、歯科材料など成人で一般的にみられる口腔内環境因子によるエピジェネティクスな影響については明らかとなっていない。歯周炎に関わる環境因子としての多くは、歯周病原菌の感染によるのは周知のところであるが、口腔内で長時間にわたり歯周病原菌に曝されている環境下にあることもエピジェネティクス修飾を誘発し、歯周病の発症・進行に関与している可能性が考えられる。本研究では、歯周炎の発症に関与するエピジェネティクスについてゲノム網羅的に解析し、歯周炎進行の予防や治療に意義のあるエピジェネティクスを同定することを目的とした。
初年度の実施計画としては、まず、歯周病原菌感染による培養口腔上皮細胞の網羅的エピジェネティックス解析を行う目的で研究を行った。
先ずヒト歯肉粘膜上皮からの上皮細胞を単離し、歯周病菌を作用させる前段階として、歯周病菌由来LPSを培養上皮に作用にさせた。エピジェネティックな環境変化の観察のため長期でLPSを作用させたものを試料として用いた。培養後はGenome DNA抽出し、メチル化解析の一つとしてメチル化特異的PCRを行ったところ、高メチル化部位があることが確認された。その後、同様に上皮細胞を用いてP. gingivalis、F.nucleatumの2種の生菌を直接作用させる方法により細胞障害性を観察するも、培養条件が困難であったため、細菌はcell wall を用いた条件設定で行い、その後、DNA抽出し、エピジェネティック解析を行う予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
初年度の達成目的からやや遅れている理由としては、時間的な制約がある中での実験条件を設定するために費やす時間が多く、予定通りの進歩状況ではないが、歯周病原菌が及ぼすエピジェネティックな影響についての実験の方向性的には順当に進行している状況であるため、次年度以降引き続き研究遂行する予定である。
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| 今後の研究の推進方策 |
歯周病原菌感染による培養口腔上皮細胞のエピジェネティクス機構解析のため、ゲノムDNAを抽出し、研究計画に述べた手法に従いDNAメチル化プロフィール解析とヒストンのプロフィール解析を行う。マイクロアレイなどにより網羅的な解析を行った後に、ターゲット因子を絞り、特異的に歯周病原菌感染によりエピジェネティックス修飾をうける因子について、高メチル化や異常ヒストン修飾を起こした因子についての解析をさらに追跡し、明確な発現変化をみるものを探り歯周病関連の高メチル化因子を同定と異常ヒストン修飾因子を確定する。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
進行状況が当初の予定よりやや遅れており、マイクロアレイなどのエピジェネティック解析に関わる研究段階に進行するまでに当該年度は至らなかったが、次年度に２５年度で遅れていた分について研究遂行する予定であり、その部分については次年度使用額としての必要性が生じる。
・エピジェネティクス(DNAメチル化とヒストン修飾)のマイクロアレイによる網羅的解析
・高メチル化がみられたものについてはメチル化解析（MSP法、COBRA法、Site-specific DNAメチル化検出法）
・異常ヒストン修飾が見られたものについて、ヒストン修飾の解析（ChIP-クロマチン免疫沈降法など）
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