| 研究課題/領域番号 |
25513010
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| 研究機関 | 大阪医科大学 |
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研究代表者 |
中西 豊文 大阪医科大学, 医学部, 准教授 (10247843)
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| 研究分担者 |
辻 求 大阪医科大学, 医学部, 教授 (60144466)
田窪 孝行 大阪医科大学, 医学部, 名誉教授 (60163359) [辞退]
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | 質量イメージング / アミロイド原性 / トランスサイレチン / コンゴレッド染色性 / 沈着分子 |
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| 研究実績の概要 |
昨年度に引き続き病院病理部の協力を得て、『アミロイド症』と確定診断された組織切片を、抗原賦活剤（イムノセーバー）にてアミロイド原性タンパク質分子の高次構造を再構築しOn-tissueトリプシン消化後、質量イメージング／組織免疫学的検索にて酵素断片化ペプチドの局在性を可視化し、病理組織学的検索結果と一致する事を明らかにすると共に、アミロイド起因タンパク質を同定した。具体的には、２５種類のアミロイド原性タンパク質分子の中で、従来よりプロテオミクスにて確定診断を実施してきたTTR起因アミロイドーシスと原因タンパク質分子が不確定な症例についてコンゴレッド／チオフラビン-T染色／抗TTR・抗免疫グロブリン軽鎖（λ／κ鎖）・抗β２ミクログロブリン／抗アミロイド-P成分／抗血清アミロイドA抗体との反応性を明らかにし、同時に、抗原賦活化／On-tissueトリプシン消化／質量イメージング／タンデム質量分析・データベース検索にて、免疫グロブリン軽鎖（λ鎖）、TTR分子のアミノ酸配列一致するタンデム質量分析結果が得られた。また、その質量イメージング解析によるアミロイド分子の組織切片内局在性は従来の免疫組織学的検索によるアミロイド原性分子の局在性とほぼ一致した。この事は、本質量イメージング解析結果はアミロイド症確定診断に際して、相補的解析手段として有用である事が立証出来た。今後は、より『ミクロ』な視点でのアミロイド原性タンパク質分子の解析望まれた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本学倫理委員会承認研究題目『新鮮摘出組織を解析対象とした質量イメージングによる次世代病理診断法の開発とその臨床応用』を実践して行く過程で、病院病理部の協力の下、『アミロイド症』と確定診断された組織標本を分与頂き、本研究を進めている。これまでに、アミロイド起因因子として免疫グロブリン軽鎖（λ鎖）およびTTR同定および組織内局在を明らかにした。
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| 今後の研究の推進方策 |
コンゴレッド染色陽性のFFPE組織切片部位をレーザーマイクロダイセクション（H２６年度導入）にて切除し、プロテオミクス手法にてTTR分子内システインSH残基の異常修飾構造を解析し、ーSH基が種々の酸化過程を経てプロテアーゼ抵抗性のαアミノアクリル酸（例：デヒドロアラニン等）形成への道筋を検証する。同時に、システイン-S-スルホン酸誘導アミロイド原性獲得仮説の検証をin vivo実験にて検証する。
１）TTR起因性アミロイド－シス患者心筋の塩酸グアニジン抽出物を用いて、立証する。
２）同定した異常修飾構造がこれまでの『in vitro』実験での結果を矛盾しない事を立証する。
３）TTR以外のアミロイド原性タンパク質について同様のシステイン-SH基由来異常修飾構造を検証し、我々の『アミロイド原性獲得機序』仮説を検証する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
本研究を遂行する上で消耗品等の使用量が当初予定より下回り、その差額分を次年度に繰り越した方が得策であると判断した為
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| 次年度使用額の使用計画 |
平成２７年度の消耗品購入費等に上乗せし、処理する予定
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