DNA二重鎖切断(DSB)は最も重篤なDNA損傷であり、主として、非相同末端結合(NHEJ)と相同組換えで修復される。本研究は、DNA末端形状の違いによるNHEJの反応過程や難度の違い、この違いへの細胞の対応を「トリアージ機構」と呼び、これを再現する新しい試験管内(in vitro)実験系を構築し、分子機構の一端を明らかにすることを目的として行った。細胞抽出液に制限酵素で処理したプラスミドDNAを添加して反応させた後、PCRでの定量を試みた。細胞抽出液調製、DSB修復(結合)反応、反応産物解析法をいくつか試み、DNA末端形状によるDSB修復(結合)反応の違いを再現することができた。
|