2013 年度実施状況報告書

IL-8レポーター細胞を用いた微生物毒素簡易定量法の開発

研究課題

研究課題/領域番号	25550076
研究機関	東北大学
研究代表者	木村裕東北大学, 大学病院, 助教 (90375056)
研究期間 (年度)	2013-04-01 – 2015-03-31
キーワード	エンドトキシン / ルシフェラーゼアッセイ
研究実績の概要	Toll Like Receptor(TLR)1から9のアゴニストでIL-8レポーターであるTHP-G8細胞を刺激したところ、TLR 1, 2, 4, 5, 6, 7のアゴニストでIL-8レポーター活性が上昇した。一方、THP-G8細胞の親細胞であるTHP-1細胞においてTLRの発現を確認したところ、TLR8以外のTLRの発現が認められた。当研究ではレポーター細胞を試料とともに37℃で6時間培養する過程があり、試料中に生存する細菌の影響を排除するためなんらかの滅菌処理を行う必要がある。Lipopolysaccharide(LPS)、大腸菌菌体の刺激によりIL-8レポーター活性が上昇するが、その上昇が種々の滅菌処理により変化するかを検討した。LPSによるIL-8レポーター活性の上昇は、0.20μmミリポアで70%ほどに、オートクレーブで10%ほどに抑制された。Softexによる照射処理では抑制されなかった。大腸菌菌体によるIL-8レポーター活性の上昇は、大腸菌に対するアンピシリン処理、オートクレーブ処理で抑制されなかった。仙台市の水系である広瀬川において、上流の大倉ダム、中流（仙台市街）、下流（名取川との合流後）、海域（仙台湾）で水を採取しIL-8レポーター活性を測定した。蒸留水に比べ、大倉ダム、中流で中程度のIL-8レポーター活性の上昇、下流で高いIL-8レポーター活性の上昇が認められた。これらの上昇は試料をミリポアに通すことにより抑制されたが、試料のオートクレーブ処理では抑制されなかった。海水ではIL-8レポーター活性の上昇は認められなかった。
現在までの達成度 (区分)	現在までの達成度 (区分) 2: おおむね順調に進展している理由試薬の入手が困難である理由により「末梢血由来単球細胞におけるTLR agonist９種類、NOD 受容体agonist ２種類、ブドウ球菌由来スーパー抗原刺激後のIL-8 mRNA 発現との比較」は未施行であるが、その代替として、平成２６年度施行予定の「河川、湖沼などの環境汚染水中の毒素の定量」を先行して行っている。
今後の研究の推進方策	平成２５年度施行予定の「末梢血由来単球細胞におけるTLR agonist９種類、NOD 受容体agonist ２種類、ブドウ球菌由来スーパー抗原刺激後のIL-8 mRNA 発現との比較」を行う。平成２６年度施行予定の「複数のTLR、NOD 刺激物質混入時の標的受容体の同定」をおこない、IL-8レポーター活性が上昇した河川、湖沼について標的受容体の同定が可能であるかを検討する。