|
本申請研究では、ミトコンドリア(Mt)を遺伝子レベルで制御するシステムを構築し、Mtのもつ多彩な生物学的機能の基礎的理解を深め、細胞機能を新たなアプローチから理解する。具体的には、Mtセントラルドグマ（複製・転写・翻訳）が営まれているMt最内部(Mtマトリクス)を標的とし、「機能性核酸によるRNA のノックダウン」および「人工Mt-DNA ヌクレオイドによるMt外来遺伝子発現」を実施する。Ｈ26年度は、下記の項目を中心に研究を遂行した。
1. 人工Mt-DNA ヌクレオイドの構築およびMITO-Porterへのパッケージング： 遺伝子をナノ粒子化した人工Mt-DNA ヌクレオイドをMt移行能が最適化されたMITO-Porter にパッケージングし、単離Mt マトリクスへの分子送達を試みた。Mtマトリクス内部への核酸導入を評価するプロトコルを構築し、Mtマトリクス内部への遺伝子送達を確認した。
2. Mt 遺伝子発現の検証および細胞機能評価: Mt特異的プロモーターHSPを有するpDNA骨格(pHSP)に、外来タンパク質をコードするMt遺伝子コドン（NanoLucタンパク質）を挿入したMt遺伝子発現pDNA [pHSP-mtLuc(CGG)]の構築に成功した。種々の検討を経て、pHSP-mtLuc(CGG)がMt外来遺伝子発現を可能とするDNAベクターである事を示すことができた（品質の確認）。また、人工Mt-DNA ヌクレオイド搭載MITO-Porter を用いた、生細胞Mt における遺伝子発現の検証も実施した。
|
