ローリングサークル増幅と蛍光三重鎖DNAを組合わせたmiRNA検出法

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 25620126
• 研究機関: 東京工業大学
• 研究代表者: 清尾 康志 東京工業大学, 生命理工学研究科, 准教授 (20313356)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: 蛍光核酸 / 三重鎖核酸 / 遺伝子検出

研究実績の概要

miRNAは種々の疾患の診断マーカーとして注目されている。生体内には非常に多種のmiRNAが同時に存在し、それらが複数の遺伝子を制御している。つまり、miRNAを迅速に検出するには、生体・組織・細胞中の多種類のmiRNAをワンポットで検出するmultiplex検出技術が必要不可欠である。本研究では起案者独自の蛍光三重鎖DNAとRCAを組合わせた新規検出法によりmiRNAのmultiplex検出を実現することを目指した。
平成２５年度までに合成した５-(４－ヒドロキシ-3-メチルベンゾフラン-2-イル）デオキシウリジンからさらに構造を改変し、４－シアノ、４－アミノ、４－ジメチルアミノ、４－エチニル、４－フェニルエチニル誘導体を合成しその蛍光特性を調べた。またウラシルに変えて７－デアザグアニンにベンゾフランを導入した誘導体の合成にも成功した。その結果、置換基を導入することでより長波長に蛍光は長がシフトした誘導体を開発することに成功した。これらの蛍光核酸は三重鎖形成に伴い様々波長で蛍光を発するプローブの開発に有用であり、miRNAのmultiplex検出への応用が可能である。

研究成果

• [雑誌論文] Controlling the fluorescence of benzofuran-modified uracil residues in oligonucleotides by triple-helix formation (2015)
  • 著者名/発表者名: Takashi Kanamori, Hiroki Ohzeki, Yoshiaki Masaki, Akihiro Ohkubo, Mari Takahashi, Kengo Tsuda, Takuhiro Ito, Mikako Shirouzu, Kanako Kuwasako, Yutaka Muto, Mitsuo Sekine, Kohji Seio
  • 雑誌名: Chembiochem 巻: 16 ページ: 167-176
  • DOI: 10.1002/cbic.201402346
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Synthesis of Responsive Fluorescent Nucleobases 7-(Benzofuran-2-yl)-7-deazahypoxanthine and 7-(Benzofuran-2-yl)-7-deazaguanine Using Cross-coupling Reaction (2015)
  • 著者名/発表者名: Munefumi Tokugawa, Kazuhei Kaneko, Masanori Saito, Takashi Kanamori, Yoshiaki Masaki, Akihiro Ohkubo, Mitsuo Sekine, Kohji Seio
  • 雑誌名: Chemistry Letters 巻: 44 ページ: 64-66
  • DOI: 10.1246/cl.140879
  • 査読あり
• [学会発表] Synthesis and photophysical properties of 7-modified 7-deazaguanosine analogues (2014)
  • 著者名/発表者名: Munefumi Tokugawa, Kazuhei Kaneko, Jan Cristian Canggadibrata, Takashi Kanamori, Yoshiaki Masaki, Akihiro Ohkubo, Marcus Wilhelmsson, Morten Grotli, Mitsuo Sekine, Kohji Seio
  • 学会等名: The 41th international symposium on nucleic acids chemistry
  • 発表場所: Kitakyushu international conference hall
  • 年月日: 2014-11-05 – 2014-11-07