| 研究概要 |
二種類の抗体結合ドメインの最適な結合による超高性能抗体結合素子の構築を目標として，以下の検討を行った。ターゲットとする抗体IgG Fc領域に結合する天然由来タンパク質としては，Staphylococcus Protein A由来のドメイン(PA), Streptococcus Protein G由来のドメイン(PG)を用いた。本年度は，これまで構築したPAxPGをベースに，２種類の抗体結合ドメインと各種リンカーを組み合わせた融合タンパク質を大腸菌を用いて発現・精製し，これらの各種抗体IgGへの結合能を評価した。結合能の評価法としては，ELISAに加え，フォルテバイオ社製タンパク質パーソナルアッセイシステムを用いた速度論的解析を行った。抗体としては，マウス，ヒトの各IgGサブクラスを主に用いて評価した。なお， PAxPGはある種のヒトFabにもかなり強く(Kd < 10 nM)結合することが確認されているため，ヒトIgGはFc断片にした場合についても評価した。
この結果，PA-PG間リンカーを(G4S)n, n=0, 2, 4, 6とした場合，最も高い結合能がn=6の場合に得られ，ヒトFcの場合Ka値としてn=0の約10倍になった。比較としてヒトFabを用いた場合，n=4で最大の結合能を示した事から，これは分子内の二つの結合部位間の距離を反映しているものと考えられる。また，マウスIgG1に対するn=4の結合能は，天然Protein A, Protein Gのそれを上回っており，ドメイン間距離の最適化により，天然タンパクを上回る結合能を持つタンパク質を得ることが出来たと言える。以上の結果をまとめ，二回の学会発表（生化学会年会，生物工学会大会）を行った。
|
