| 研究課題/領域番号 |
25640029
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| 研究種目 |
挑戦的萌芽研究
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| 研究機関 | 長崎大学 |
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研究代表者 |
新 竜一郎 長崎大学, 医歯(薬)学総合研究科, 准教授 (90452846)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | レビー小体型認知症 / 神経変性疾患 / alpha-synuclein |
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| 研究概要 |
研究計画（１）について、まず6Xヒスチジンタグと融合させたalpha-synucleinの大腸菌発現用ベクターを作製した後、大腸菌に遺伝子導入し、発現を誘導した後、6Xヒスチジンタグに結合するカラムを用いて、Fast Protein Liquid Chromatography（FPLC）により、目的のalpha-synucleinタンパク質を精製した。その後タグの与える影響を測定するため、タグを除去した。精製したalpha-synucleinリコンビナントタンパクの２次構造解析をCD (circular dichroism：円二色性スペクトル)を用いて行い、alpha-synucleinリコンビナントタンパクがrandom coil様の構造をとっていることを確認した。研究計画（２）では（１）で精製したalpha-synucleinリコンビナントタンパクを用いてRT-QUIC法（シード依存的異常凝集タンパク高感度増幅法）の条件検討を行った。その結果、シードなしでは反応が起きないが、シードとしてレビー小体型認知症の脳組織のホモジネートとして加えたときのみ、反応が起きる条件を見出した。また電子顕微鏡を用いてRT-QUIC法において生成したフィブリルを観察した。さらにレビー小体型認知症の脳ホモジネート中のalpha-synuclein凝集体のシード活性をRT-QUIC法とEndo-point dilutionを組み合わせることにより半定量することにも成功した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
alpha-synucleinリコンビナントタンパクの精製、2次構造解析など現在のところ順調に遂行している。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後も研究計画にそって本研究を推進する。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
次年度の研究計画遂行の上で必要性を認めたため。
次年度使用額は物品費として用いる予定である。
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