迅速かつ効率的な血液分化細胞の解析構築

2014 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 25640044
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 山崎 聡 東京大学, 医科学研究所, 助教 (50625580)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2016-03-31
• キーワード: 血液細胞 / 蛍光タンパク質

研究実績の概要

我々は、本研究課題は各血球系特異的に様々な組み合わせの蛍光タンパク質を発現させることにより、抗体を用いずに瞬時にマウスの血球分化をフローサイトメーターにて解析するマウスの開発を目指した。
まず、フローサイトメーターを用いて蛍光波長が重なり合わない蛍光タンパク質の種類を探索することとした、現時までに数多くある蛍光タンパク質が同定されている。我々は様々な蛍光タンパク質を発現させた細胞株を作製し、実際にフローサイトメーターにて蛍光波長の分離が良い5種類の蛍光タンパク質を選び出した。しかし、血球マーカーは大きく分けてもB細胞、T細胞、マクロファージ、顆粒球、赤血球、血小板と６色を使用しなくてはならないという問題が出てきた。また、蛍光タンパク質を導入するマウスES細胞を独自に樹立し（B6)、各分化マーカー分子のプロモーター領域を解析した。マウスの作製に関しての準備を行った。
最終的にはプロモーターと蛍光タンパク質を数種類繋げた遺伝子を１つの細胞に挿入する方法として、申請は人工染色体を用いたシステムにて行う予定である。そのシステムは鳥取大学との共同研究により行う予定である。しかし、人工染色体を作成もしくは導入する実験は熟練の技術が必要であるために、技術を研究室に取り入れる為に習得することも視野に考えている。さらにはトランスジェニックマウスの作成に関しても胚操作技術を習得することにより、迅速なマウスの作成を行っていく予定である。

現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

計画ではすでに蛍光タンパク質の組み合わせが終了しており、マウスの作製が始まっている予定であったが、予期せぬ問題により、遅れてしまっている。

今後の研究の推進方策

今後の研究としては、現在のサイトメーターや細胞イメージ解析装置は蛍光タンパク質の蛍光波長を読み取り分離できる機器が存在する。その機器を用いることにより、近接した蛍光波長を出す蛍光タンパク質においても、分離可能であると予定しており、６色以上の組み合わせを目標にしている。

研究成果

• [雑誌論文] Effective treatment against severe graft-versus-host disease with allele-specific anti-HLA monoclonal antibody in a humanized mouse model. (2015)
  • 著者名/発表者名: Nakauchi Y, Yamazaki S, Napier SC, Usui J, Ota Y, Takahashi S, Watanabe N, Nakauchi H.
  • 雑誌名: Exp Hematol 巻: 43 ページ: 79-88
  • DOI: 10.1016/j.exphem
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Generation of recombination activating gene-1-deficient neonatal piglets: a model of T and B cell deficient severe combined immune deficiency. (2014)
  • 著者名/発表者名: Ito T, Sendai Y, Yamazaki S, Seki-Soma M, Hirose K, Watanabe M, Fukawa K, Nakauchi H
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 9 ページ: e11833
  • DOI: 10.1371/journal.pone
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Generation of mouse functional oocytes in rat by xeno-ectopic transplantation of primordial germ cells. (2014)
  • 著者名/発表者名: Hayama T, Yamaguchi T, Kato-Itoh M, Hamanaka S, Kawarai M, Sanbo M, Tamura C, Lee YS, Yanagida A, Murayama H, Mizuno N, Umino A, Sato H, Yamazaki S, Masaki H, Kobayashi T, Hirabayashi M, Nakauchi H.
  • 雑誌名: Biol Reprod 巻: 91 ページ: 89
  • DOI: 10.1095/biolreprod
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Down syndrome-associated haematopoiesis abnormalities created by chromosome transfer and genome editing technologies. (2014)
  • 著者名/発表者名: Kazuki Y, Yakura Y, Abe S, Osaki M, Kajitani N, Kazuki K, Takehara S, Honma K, Suemori H, Yamazaki S, Sakuma T, Toki T, Shimizu R, Nakauchi H, Yamamoto T, Oshimura M.
  • 雑誌名: Sci Rep 巻: 289 ページ: 6139
  • DOI: 10.1038/srep06136
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Gene targeting study reveals unexpected expression of brain-expressed X-linked 2 in endocrine and tissue stem/progenitor cells in mice. (2014)
  • 著者名/発表者名: Ito K, Yamazaki S, Yamamoto R, Tajima Y, Yanagida A, Kobayashi T, Kato-Itoh M, Kakuta S, Iwakura Y, Nakauchi H, Kamiya A.
  • 雑誌名: J Biol Chem 巻: 24 ページ: 29892
  • DOI: 10.1074/jbc.M114.580084
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [備考] 幹細胞治療
  • URL: http://stemcell-u-tokyo.org/sct/