| 研究実績の概要 |
従来技術によるモデル動物作製は、宿主ゲノム改変の困難性、染色体を侵襲することに起因する予期しない遺伝子発現制御、系統維持の問題から多大な労力が費やされてきた。これら課題を解決するために、本研究では簡便化を可能とする新規モデル動物作製システム開発を目的として、マウス個体において極めて安定なマウス天然染色体由来マウス人工染色体(MAC)ベクターを用い、ヒトゲノムの導入および対応遺伝子の翻訳除去を同時に行い、簡便なヒト型モデルマウス作製を目指す。
本年は以下のステップで研究を進めた。
１．ヒトPXR遺伝子の搭載：MAC上のMIサイトにヒトPXR遺伝子を導入するためにヒトPXRを含むBACの改変を行った。次にMI-MACを保持するCHO細胞内に上記ヒトPXR改変BACをインテグレースとともにリポフェクション法にて共導入し、薬剤選択を行った。PCR法およびFISH法によりヒトPXR遺伝子がMI-MAC上に搭載できていることを確認した。
2. shRNA発現ユニットのMI-MACへの搭載のための改変：昨年度までに選別したマウスおよびラットのPxrの発現を抑制し、ヒトPXRの発現に影響を及ぼさないshRNA候補の２種類(A, B)について、Aを２コピー、Bを２コピー、A・Bそれぞれ1コピーずつ、の３種類組み合わせでMI-MACベクター上に搭載するためのベクターを構築した。
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