| 研究課題/領域番号 |
25640072
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| 研究種目 |
挑戦的萌芽研究
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| 研究機関 | 地方独立行政法人宮城県立病院機構宮城県立がんセンター(研究所) |
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研究代表者 |
伊藤 しげみ 地方独立行政法人宮城県立病院機構宮城県立がんセンター(研究所), がん薬物療法研究部, 特任研究員 (80600006)
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| 研究分担者 |
田沼 延公 地方独立行政法人宮城県立病院機構宮城県立がんセンター(研究所), がん薬物療法研究部, 主任研究員 (40333645)
佐藤 郁郎 地方独立行政法人宮城県立病院機構宮城県立がんセンター(研究所), ティッシュバンクセンター, センター長 (50225918)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| キーワード | 代謝 / 解糖系 / ワールブルグ効果 / PKM / スプライシング |
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| 研究概要 |
発がんの過程においては、細胞のエネルギー代謝系の一つである解糖系における、ピルビン酸キナーゼM（PKM）のアイソフォーム変換（PKMスイッチ）が不可欠と考えられている。PKMスイッチを、細胞自身の蛍光によって検出できるマウス（PKMスイッチ可視化マウス）の作製に取り組んだ。
PKMスイッチ可視化のためのレポーター遺伝子を埋め込んだBAC DNAクローンを、マウス受精卵へとマイクロインジェクションし、上記レポーターを染色体に組込んだマウス（BAC-トランスジェニックマウス・F0世代）の作製に取り組んだ。当初BL6系統にて試行していたが、効率が悪かったので、中途よりBDF1系統に切り替えて作製を行った。得られた産仔から、ゲノムPCRによって、トランスジーン陽性の３個体を同定した。これら３個体についてBL6系統への戻し交配を行い、ライン化した。ライン化したマウスでは、少なくもその後２世代にわたり、導入遺伝子の保持が確認された。しかしながら、マウス組織やマウス由来細胞を用いて、導入レポーター遺伝子の発現を、ウエスタンブロット法、フローサイトメトリー、組織切片解析により検討したところ、レポーター遺伝子そのものは保持されているにも関わらず、タンパクレベルあるいは蛍光レベルでも、その発現がみとめられなかった。上記のような事態を受け、レポーター遺伝子トランスジェニックマウスを追加作製することを決定した。追加作製に当たっては、プラスミドベクター上のレポーター遺伝子を、直接マウス受精卵にインジェクションすることとし、準備を進めている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
可視化マウスラインの樹立に遅れがみとめられるため。
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| 今後の研究の推進方策 |
トランスジェニックマウス作製法を改良する。得られたマウスのライン化過程を迅速化する。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
消耗品費が、予想よりも少額で済んだため。
研究をより円滑に推進するため、消耗品費を計画よりも増額する。
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