研究課題
生命活動の基本的な情報伝達機構であるCa2+シグナルの、新しい測定技術の開発を目的とする。初年度に、本合成で最もステップ数の多いCa2+蛍光プローブの合成を終えた。これを用いてプロトタイプの蛍光プローブを合成し、既存の顕微鏡系を用いたプレ評価を行った。HeLa細胞をモデル細胞として、細胞内での評価も行った。蛍光強度、バックグラウンド、シグナル・ノイズ比、細胞毒性、細胞内での分散性、細胞内での局在能の付加、といった基本情報を元に、一つのプローブ設計指針に到達した。そこで、次のプローブ合成を行い、これについての評価を進めた。顕微鏡系はプローブに合わせ、最適となるよう変更した。生きたHeLa細胞内にプローブを導入し、まずプロトタイプと同様に、シグナル・ノイズ比、細胞毒性、細胞内での分散性、細胞内での局在能の付加といった基本性能を確認した。これらとあわせ、HeLa細胞を刺激した際に生じる細胞内Ca2+濃度変化がどのように計測されるかについて、顕微鏡下で評価した。しかしCa2+蛍光プローブの蛍光強度が低く、広くパラメータをふった条件検討を行うのにあわせ、顕微鏡系の再検討も行ったが、十分なシグナル・ノイズ比を得られないことが次年度の初期に明らかとなった。そこで別のパラメータを計測できるプローブを用いることにした。またこれと並行して、プローブを細胞内小器官へ選択的に集積させる仕組みを導入した。これらについては成功したことから、現在、論文発表の準備を進めている。
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BIOPHYSICS
巻: 10 ページ: 109-119
http://doi.org/10.2142/biophysics.10.109
